基本信息
- 项目名称：
- 猪屎豆致SD大鼠肝硬化腹水动物模型研究
- 来源：
- 第十二届“挑战杯”省赛作品
- 小类：
- 生命科学
- 大类：
- 自然科学类学术论文
- 简介：
- 主要是研究猪屎豆汤药致肝硬化腹水SD大鼠各项指标以及致肝硬化腹水的机制的，以及存活时间。以确定此模型，更好地应用到有关肝硬化腹水的实验研究中。
- 详细介绍：
- 研究方案： 一．研究目标：研究出与临床上肝硬化腹水病人更加接近的肝硬化腹水SD大鼠的模型，以便进一步利用到研究有关肝硬化腹水实验中去。 二．研究内容：主要是研究猪屎豆汤药致肝硬化腹水SD大鼠各项指标以及致肝硬化腹水的机制的，以及存活时间。以确定此模型，更好地应用到有关肝硬化腹水的实验研究中。 三．研究方法： 1．材料：健康SD雄性大鼠20只，体重：200-250g 2．试剂与器材： （1）猪屎豆：由医药市场购买； （2）氯胺酮； （3）HE染色； （4）门静脉插管； （5）组织切片机等。 3．观察指标: （1）肝功能检查：采用断尾取血的方法采血，分别于用药前及用药后第3，1O，2O天测定肝功能，包括血清透明质酸（HA）谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、γ-谷氨(酰转肽酶(γ-GT))、碱性磷酸酶(ALP)、总胆红素(TBIL)、白蛋白(ALB)、球蛋白，由自动生化分析仪测定。 （2）门静脉压检测：用氯胺酮麻醉SD大鼠，打开腹腔，门静脉插管测门静脉压力。 （3）腹水检测：观察实验组造模前后腹围变化，实验结束后处死实验组的大鼠，打开腹腔,测量腹水量。 （4）肝脏组织学观察：将固定好的肝脏组织用石蜡包埋、制成组织切片，常规HE染色。 （5）肝硬化程度检查：用Child pugh分级的方法。 4．动物分组与猪屎豆给药： 取20只健康SD大鼠，按照随机数字表法分组，分成2组，实验组10只，对照组10只。 实验组（10只）：用猪屎豆30g，1000ml水，煎40分钟，第1-2周按2.0ml/100g灌胃，每天2次，第3-4周根据动物的饮食、体质量反应情况，剂量调整为1.0ml／100g； 对照组（10只）：生理盐水，按2.0ml/100g灌胃对照组。 5．统计学处理： 使用SPSS 13．0统计软件包进行数据处理，定量资料经方差齐性检验，对方差齐的资料采用t检验的方法，对方差不齐的资料采用方差分析，检验水准a=0．05。 6．技术路线： A．选20只健康SD大鼠，按随机数字表法分组，分成2组，实验组10只，对照组10只。化验每组中各大鼠的血清透明质酸（HA）谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、γ-谷氨(酰转肽酶(γ-GT))、碱性磷酸酶(ALP)、总胆红素(TBIL)、白蛋白(ALB)、球蛋白； B．实验组用猪屎豆30g，1000ml水，煎40分钟，第1-2周按2.0ml/100g灌胃，每天2次，第3-4周根据动物的饮食、体质量反应情况，剂量调整为1.0ml／100g；用生理盐水，按2.0ml/100g灌胃对照组。持续一个月左右。在第二周末和第四周末化验每只大鼠的各项肝功能生化指标，并从每组随机抽取2只大鼠，用氯胺酮麻醉SD大鼠，打开腹腔，门静脉插管测门静脉压力；处死大鼠，打开腹腔,测量腹水量；将固定好的肝脏组织用石蜡包埋、制成组织切片，常规HE染色，做组织病理学切片观察；用Child pugh分级的方法作为诊断肝硬化程度的指标； C．比较实验组和对照组的各项肝功能生化指标
作品专业信息
撰写目的和基本思路
- 目前肝硬化腹水动物模型的复制方法主要有采用胆管结扎复制肝硬化腹水动物模型和四氯化碳皮下或腹腔注射法或结合酒精的四氯化碳复合法、门静脉狭窄法等，这需要特殊手术过程及材料，制作繁琐，成功率低，死亡率高。 根据前人已经研究过猪屎豆对肝脏有毒性作用，本研究旨在建立符合肝硬化腹水的简便、可靠、稳定的动物模型，为进一步研究肝硬化腹水的病理变化及相关治疗作准备，更适合用于临床研究和实验研究中。
科学性、先进性及独特之处
- 目前实验室做肝硬化腹水模型主要采用胆管结扎复制肝硬化模型和CCL4和乙醇反复给药，但是前者操作起来很困难，而后者成功率不是很高。此课题发挥中药的优势，用中药猪屎豆来研究制造出肝硬化腹水SD大鼠的模型。如果能成功复制出模型，将能够解决以上的问题，并为进一步研究肝硬化腹水的病理变化及相关治疗作准备，更适合用于临床研究和实验研究中。
应用价值和现实意义
- 通过研究猪屎豆造模SD大鼠肝硬化腹水动物模型，不仅可解决前人制造肝硬化腹水大鼠所面临的问题，还为后人制造肝硬化腹水模型提供广阔的道路，让人们知道制造肝硬化腹水模型的方法不仅仅局限于西医的方法，中医中药也具有无可伦比的优势。
学术论文摘要
- 目的：对猪屎豆致SD大鼠的肝硬化腹水模型研究，构建出稳定的肝硬化大鼠模型并降低制模过程中大鼠的死亡率，为相关的实验提供稳定可靠的疾病模型。材料和方法：10只SD大鼠，造模前适应性饲养3天，低剂量组是由猪屎豆中药煎取液（浓度为100%），每1g浓缩液含1g全药，灌胃一天一次，高剂量组是一天两次，大鼠灌胃给药体积为1ml/100g。结果：造模四周后，高剂量组的肝细胞水肿，肝小叶结构消失，淋巴细胞浸润，嗜酸性细胞变性。低剂量组的嗜酸性粒细胞没有明显变性，情况较高剂量组轻。结论：猪屎豆对SD大鼠的肝脏具有损害性，但要造成肝硬化动物模型仍需要较长时间。
获奖情况
- 获得广州中医药大学第一临床医学院创新课题立项奖 获得广州中医药大学“挑战杯”立项奖
鉴定结果
- 本次血液检验结果主要由广州金域体检中心提供。本次病理切片的制作由广州中医药大学第一附属医院病理科协助完成
参考文献
- [1]连文琰．猪屎豆属药用植物的调查[J]．中药材，1986，9(6)：19—22． [2]Jiangsu New Medical College(江苏新医学院)． e Dic—fionary of Traditional Chinese Medicine(中药大辞典)．Shanghai：Science and Technology Press，2001． [3]Sun WJ(孙文基)，Sheng JF(绳金房)．Concise Handbook of Natural Active Components(天然活性成分简明手册)．Beijing：China’s Medicine and Technology Press，1998． [4] Fu PP，Xia Q，Chou MW，以o2．C,en~oxie and tumorlgenle pyrrolizidine alkaloids in Chinese herbalplants．J Nanjing Med Unlv，2005，19：1-4． [5] Zhao XG(赵显国)，Wang ZT(王峥涛)，Zhang M(张勉)，et al. Hel~tOtoxle pyrrolizidine MkMoi~ and Chjnese herbal medicine．Gh／n Tradit Herb Drugs(中草药)，1998，29：343． [6] Lyfora CL，Vergara GG，Moeller DD．Hepatic veno—occlusive disease originating in Ecuador[J]．Gastroenterology，1976，70(1)：105—108． [7] Mattocks AR．Chemistry and toxicology of pyrrolizidine alkaloids．London Academic Presss，1986． [8]Smith LW ，Culvenor C C．Plant sources ofhepatotoxie pyrrolizidine alkaloids．JNat Prod，1981，44：129-152．
同类课题研究水平概述
- 目前，肝硬化、门脉高压的动物模型包括源于肝纤维化的动物模型(如CCl4、胆总管结扎或缩窄等)及门静脉缩窄等方法，但该模型制作为刨伤性，死亡率高，不能大量成模，胆管有时再通而使组织学发生逆转。 猪屎豆又称响铃豆、野黄豆，是一种豆科绿肥用植物，一年生或多年生，分布于热带、亚热带，约有600余种，我国的猪屎豆属植物多达42种，分布于西郊、东南沿海及西南各省，以广东、广西、海南、台湾、云南、福建最多。 猪屎豆属植物的化学成分种类较多，目前从猪屎豆属植物中分离得到的化学成分主要有生物碱、黄酮类、糖、多糖、糖苷、有机酸、甾体等。其含蛋白质高，故多被利用作料，但是茎叶和种子均能引起中毒。其含有有毒成分野百合碱、吡咯烷、双稠吡咯啶生物碱等。其有毒成分含量，种子为0．40％一1．69％，茎叶、荚为0．2％，进入机体后引起肝损害，导致中枢神经系统兴奋、脑充血、黄疸、腹水、淋巴结肿大和坏死。 猪屎豆属植物大都含有吡咯里西啶生物碱，其结构由两个基本部分组成：necine base和necic acid，且1，2位多具双键。关于PAs的致畸作用报道较少，果蝇实验、A—rues实验、哺乳动物细胞培养等实验证实，本属Monocrotaline、Integerrimine、Fulvine、Senkirkine等有诱变活性。许多实验已经证明PAs及其原植物的致癌作用。 PAs是目前已知的最重要的植物性肝毒成分，被称为肝毒吡咯里西啶生物碱，其最明显的毒性是肝脏毒，可引起肝细胞出血性坏死，肝巨细胞症及静脉闭塞症等。 自十八世纪以来，人们已经认识到许多PAs是高毒性的。1976年，Lyford等报道美国1例35岁的厄瓜多尔妇女因大量腹水而就诊，经肝静脉造影和肝穿刺活检被证实患有肝小静脉闭塞病。经调查发现，她在发病前6个月长期饮用猪屎豆属植物叶茶。据流行病学调查研究，在南非、阿富汗、牙买加、印度、伊朗及前苏联等国家，大量肝病的发生与食用含PAs的食物、饮用含PAs的饮料(牛奶、茶叶等)及服用含PAs的草药有关。 基于以上的研究现状，我们将发挥中药的优势，运用猪屎豆汤剂灌胃健康SD大鼠，制造肝硬化腹水模型，以建立符合肝硬化腹水的简便、可靠、稳定的动物模型，为进一步研究肝硬化腹水的病理变化及相关治疗作准备，更适合用于临床研究和实验研究中。
