基本信息
- 项目名称：
- 川芎多糖的纯化及抗氧化研究
- 来源：
- 第十二届“挑战杯”省赛作品
- 小类：
- 生命科学
- 大类：
- 自然科学类学术论文
- 简介：
- 通过水提醇沉法将川芎多糖提取出来，提取率为5.71%，总糖含量为72.48%。采用DEAE-650C静态洗脱对川芎多糖进行纯化，确定最佳洗脱条件和洗脱次数，得到3个多糖组分。 利用紫外光解过氧化氢溶液产生羟基自由基，以对羟基苯甲酸作为捕捉剂，与羟基自由基反应后产生3，4-二羟基苯甲酸，通过HPLC检测出生成的3，4-二羟基苯甲酸含量间接测定多糖清除羟基自由基的能力。
- 详细介绍：
- 采用DEAE-650C分级，静态洗脱得到3个多糖组分，LCXP1为蒸馏水洗脱，LCXP2和LCXP3为NaCl洗脱组分。 确定了最佳静态洗脱条件：最大上样量600 mg；洗脱溶液为水、0.05 mol/L NaCl、0.35 mol/L NaCl；洗脱次数3次。 在研究多糖对•OH的清除率时，一般采用分光光度法、荧光光度法测定，而用 HPLC测定多糖对 •OH的清除作用报道较少。本研究以对羟基苯甲酸为•OH捕捉剂，采用高效液相色谱法检测对羟基苯甲酸与•OH反应的生成物3，4-二羟基苯甲酸的含量来计算多糖对•OH的清除率。本实验建立的 HPLC测定川芎对羟基自由基的清除率的方法，系统性强，稳定性好，相对荧光光度法与分光光度法，提高了分析结果的准确度，对筛选清除羟基自由基的天然抗氧化剂和研究清除自由基的机制具有一定的科学意义。
作品专业信息
撰写目的和基本思路
- HPLC抗氧化能力评价体系，达到定量准确、快速的目的，为多糖抗氧化能力评价提供一个可靠的手段并且阐述多糖抗氧化机理。 川芎多糖的提取→DEAE-纤维素柱层析方法对川芎多糖进行分离纯化→静态洗脱方法对川芎多糖进行分离纯化→多糖含量测定→川芎多糖的组分研究； 利用紫外光解过氧化氢溶液产生·OH→捕捉剂与羟基自由基反应→通过HPLC检测含量→间接测定多糖清除羟基自由基的能力。
科学性、先进性及独特之处
- 一、采用水提醇析法提取川芎多糖，DEAE-纤维素柱层析结合静态洗脱方法对川芎多糖进行分离纯化。获得了LCXP-1，LCXP-2，LCXP-3三个多糖组分。 二、确定最佳反应条件，并且对该方法进行了方法学验证。采用公认的抗氧化剂维生素C及芦丁对该方法进行了验证。 三、川芎多糖可以通过捕捉脂质过氧化链式反应中产生的自由基，达到对自由基的直接清除作用。
应用价值和现实意义
- 本研究建立一种HPLC检测多糖清除•OH模型，通过对测定条件的优化，得到最佳实验条件。并采用公认的抗氧化剂维生素C及芦丁对该方法进行了验证。相对荧光光度法与分光光度法，提高了分析结果的准确度，对筛选清除羟基自由基的天然抗氧化剂和研究清除自由基的机制具有一定的指导意义。
学术论文摘要
- 通过水提醇沉法将川芎多糖提取出来，提取率为5.71%，总糖含量为72.48%。采用DEAE-650C静态洗脱对川芎多糖进行纯化，确定最佳洗脱条件为最大上样量600 mg；洗脱溶液为水、0.05 mol/L NaCl、0.35 mol/L NaCl；洗脱次数为3次，得到3个多糖组分分别为LCXP1、LCXP2、LCXP3。 建立了一种HPLC检测多糖清除•OH模型，通过对测定条件的优化，得到了最佳实验条件，并采用抗氧化剂维生素C以及芦丁对该方法进行了验证。利用紫外光解过氧化氢溶液产生羟基自由基，以对羟基苯甲酸作为捕捉剂，与羟基自由基反应后产生3，4-二羟基苯甲酸，通过HPLC检测出生成的3，4-二羟基苯甲酸含量间接测定多糖清除羟基自由基的能力。这样可以达到定量准确、快速的目的，为多糖抗氧化能力评价提供一个可靠的方法，对于多糖抗氧化研究具有重要意义。
获奖情况
- １．孙晓春，颜军，何钢，易勇等．川芎多糖的分离纯化及其单糖组成测定[J]．四川农业大学学报，2011，29（1）：54-60． ２．颜军，陶涛，孙晓春，易勇等．茯苓多糖的纯化及分子量测定[J]．化学与生物工程，2011，28(3):88-90. ３．颜军，孙晓春，何钢，房晨等．苦荞多糖的分离纯化及单糖组成测定[J].食品科学.（已收稿）
鉴定结果
- HPLC定量检测多糖清除羟基自由基模型。系统稳定性好，准确度高，对筛选抗氧化剂和研究清除自由基的机制具有科学意义。 川芎多糖进行分离纯化方案，设计合理，指标先进，结果可靠，结论可信。
参考文献
- [1] Rongmin Yu, Yin Yin , Wei Yang, etal .Structural elucidation and biological activity of a novel polysaccharide by alkaline extraction from cultured Cordyceps militaris. Carbohydrate Polymers ,2009, 75,166–171. [2] Libin Ye, Jianrong Li, Jingsong Zhang, et al NMR characterization for polysaccharide moiety of a glycopeptide. Fitoterapia ,2010, 81,93–96. [3] Chen Xiaoping, Tang QiChun, Chen Yan, et al.Simultaneous extraction of polysaccharides from Poria cocos by ultrasonic technique and its inhibitory activities against oxidative injury in rats with cervical cancer. Carbohydrate Polymers ,2010 (79): 409–413. [4] Huang Zhiping, Zhang Lina.Chemical structures of water-soluble polysaccharides from Rhizoma Panacis Japonici. Carbohydrate Research ,2009 ,344,1136–1140. [5] 范智超, 张志琪.川芎中多糖的研究.中草药，2006,37（7）:973-976. [6] 唐崎,王维香,王晓君.碱法提取川芎多糖的研究.时珍国医国药,2008,19（9）:2096-2097. [7] 丁文武，王维香，王晓君.酶法提取川芎多糖的研究.西华大学学报,2008,27（1）:42-43.
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