基本信息
- 项目名称：
- TGEV、PEDV二重RT-PCR检测技术的建立及其在闽西地区TGE、PED感染率调查中的应用
- 来源：
- 第十二届“挑战杯”省赛作品
- 小类：
- 生命科学
- 大类：
- 自然科学类学术论文
- 简介：
- 为更好的预防和控制仔猪猪传染性胃肠炎（TGE）和猪流行性腹泻（PED），本试验建立了能同时检测猪传染性胃肠炎病毒( TGEV)和猪流行性腹泻病毒( PEDV)的二重RT-PCR 检测技术，并应用其开展闽西地区TGE及PED的流行病学调查。
- 详细介绍：
- 为更好的预防和控制仔猪猪传染性胃肠炎（TGE）和猪流行性腹泻（PED），本试验建立了能同时检测猪传染性胃肠炎病毒( TGEV)和猪流行性腹泻病毒( PEDV)的二重RT-PCR 检测技术，并应用其开展闽西地区TGE及PED的流行病学调查。根据GenBank 收录的PEDV M 基因和TGEV N 基因序列，设计合成能分别特异性扩增TEGV和PEDV相应基因的引物，扩增目的带分别为252 bp和540 bp。在优化RT-PCR反应条件、进行敏感性试验和特异性试验等基础上, 建立了能同时检测TGEV和PEDV的方法。应用该方法检测了闽西地区63个规模化猪场，共计108份临床症状疑似猪TEG和PED的粪便及组织样品进行检测。结果显示TEGV平均阳性率为25.0%（27/108）；PEDV平均阳性率为14.8%（16/108）；混合感染平均阳性率为7.4%（8/108)。结果表明闽西地区存在猪传染性胃肠炎和猪流行性腹泻流行隐患，应引起足够重视。
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作品专业信息
撰写目的和基本思路
- 猪传染性胃肠炎（TGE）和猪流行性腹泻（PED）是两种最主要的猪病毒性腹泻，已成为造成猪场损失的最为重要的原因之一。流行在近年呈现持续上升的趋势，它而在以及其他病毒性混合感染。本文通过建立猪传染性胃肠炎病毒及猪流行性腹泻病毒二重PCR检测技术，为TGE及PED的快速诊断提供技术支撑，同时将其应用于流行病学调查，为该病的防控提供有力的参考依据。
科学性、先进性及独特之处
- TGE和PED的诊断方法中,近年来发展起来RT-PCR法是目前研究的重点，其具有快速、特异等优点,现己经广泛应用于畜禽传染病的诊断。常规单相RT-PCR方法，不能在同一体系中同时检测出TGEV与PEDV。TGEV和PEDV二重RT-PCR检测方法，比常规PCR更方便、更快速，提供可靠的和敏感的手段。在PED及TGE流行病学调查方面，尚未见有闽西地区PED及TGE流行病学调查的报道。
应用价值和现实意义
- 通过TGEV、PEDV二重RT-PCR检测技术的建立，对闽西不同地区、猪不同生长阶段的TGE及PED感染率分布情况关系的研究。通过本试验研究，了解和阐述闽西地区养猪业的的TGE及PED的主要流行情况，从而为控制疾病、降低养殖风险提供依据，同时对常见猪病的流行特征和临床症状提供素材，这为闽西地区养猪业诊断、预防和控制TGE和PED提供有价值的信息。对闽西地区的养猪业健康、可持续发展具有重要的指导意义
学术论文摘要
- 为更好的预防和控制仔猪猪传染性胃肠炎（TGE）和猪流行性腹泻（PED），本试验建立了能同时检测猪传染性胃肠炎病毒( TGEV)和猪流行性腹泻病毒( PEDV)的二重RT-PCR 检测技术，并应用其开展闽西地区TGE及PED的流行病学调查。根据GenBank 收录的PEDV M 基因和TGEV N 基因序列，设计合成能分别特异性扩增TEGV和PEDV相应基因的引物，扩增目的带分别为252 bp和540 bp。在优化RT-PCR反应条件、进行敏感性试验和特异性试验等基础上, 建立了能同时检测TGEV和PEDV的方法。应用该方法检测了闽西地区63个规模化猪场，共计108份临床症状疑似猪TEG和PED的粪便及组织样品进行检测。结果显示TEGV平均阳性率为25.0%（27/108）；PEDV平均阳性率为14.8%（16/108）；混合感染平均阳性率为7.4%（8/108)。结果表明闽西地区存在猪传染性胃肠炎和猪流行性腹泻流行隐患，应引起足够重视。
获奖情况
- 无
鉴定结果
- 本试验采用TGEV、PEDV二重RT-PCR技术调查闽西地区TGE和PED的感染率，对生猪疫病的诊断、预防和控制具有一定的参考价值，有利于促进我市生生猪产业发展。
参考文献
- [1]Saif L J，Wesley R D，and Leman A D.1992，Transmissible gastroenteritis virus in: Disease of swine，7th edition，Iowa State University press [2]喻明成等.猪流行性腹泻诊断方法的研究进展 [3]方立等.猪流行性腹泻病毒和猪传染性胃肠炎病毒的RT-PCR鉴别诊断 [4]李敬双等.猪传染性胃肠炎病毒和猪流行性腹泻病毒二联RT-PCR检测方法的建立 [5]黄海龙等.猪传染性胃肠炎和猪流行性腹泻诊断方法研究进展 等
同类课题研究水平概述
- TGE是猪的一种高度接触性肠道传染病，发病急，传播快，各种年龄的猪只都可以感染，以引起7～10日龄以内仔猪呕吐、严重腹泻和高死亡率为特征。本病最初于1945年发生在美国，1946年由此Doyle和Hutchings首次报道。之后英国、日本在1958年报道发生了TCE。从那时起，许多欧洲国家、中南美洲、加拿大、台湾省、朝鲜、菲律宾和我们中国都报道了本病。我国最早发现本病是1956年在广东省揭阳、惠来和汕头市的几个猪仓库中。1956年本病在我国广东省发现后，山东、天津、辽宁、甘肃、河北、山西、陕西等各地陆续发现本病。1987～1989年全国疫病普查，TGE在全国各地普遍存在，发病数仍居高不下，据21个省、市、自治区的统计，共发病猪2350.61万头，死亡36.14万头，平均发病率为1.61%，死亡率为0.025%。发病率以四川和海南省为最高4.48%和4.37%，其次是福建和广东省2.94%和2.89%，其它省发病率在0.1%～0.55%之间。本病与猪流行性腹泻的混合感染率也在逐年上升1990年为21.2%，随后几年的调查已上升到30.77%及44.15%。 PED是一种急性、高度接触性的传染病，以水样腹泻、呕吐、脱水和新生仔猪的高死亡率为特征。70年代初首先发现于英国和比利时。1976年，暴发了类似TGE的急性腹泻，己排除了TGEV作为病原的可能，也不是其它已知肠致病性病原，Wood把这次暴发的腹泻称为腹泻Ⅱ型，以便与70年代初发生的腹泻(称Ⅰ为型)区别。1978年Pensaert等发现一种类冠状病毒的病原与Ⅱ型腹泻暴发有关。实验表明Ⅰ型和Ⅱ型腹泻的发生是由相同的冠状病毒引起的，故把这种腹泻称为猪流行性腹泻。1973年先后在我国上海、辽宁、吉林、黑龙江、四川等地分离到TGE和PED病毒抗原。 由于传染性胃肠炎和流行性腹泻的临床表现、病理变化、流行病学等方面都非常相似，给临床诊断带来了一定的困难。诊断这两种疾病的传统方法有临床观察、病毒分离、显微病变观察、荧光抗体检测、免疫组织化学法等。近年来，随着分子生物学的发展，对于PEDV和TGEV核酸的检测方法越来越受到重视，核酸探针杂交、反转录一聚合酶链式反应、限制性酶切片段长度多态性分析等核酸检测技术陆续应用于这两种病毒的病原检测中，RT-PCR方法是目前鉴别诊断TGEV和PEDV最敏感、特异的方法。
