基本信息
- 项目名称：
- 一种分离植物或微生物总RNA的试剂组合物及其制备方法
- 来源：
- 第十二届“挑战杯”省赛作品
- 小类：
- 生命科学
- 大类：
- 科技发明制作B类
- 简介：
- 本发明涉及分子生物学领域，涉及一种细胞总RNA的制备方法，具体涉及一种分离柑橘类植物、烟叶或梨腐烂病菌总RNA的试剂组合物及其制备方法。
- 详细介绍：
- 本发明的目的在于克服传统方法样品选择性强、操作繁琐、效率较低等缺点，提供一种分离柑橘类植物、烟叶或梨腐烂病菌总RNA的试剂组合物及其制备方法。本发明的核心是建立一种快速、高效而又廉价的RNA提取方法。该方法适合分离柑橘类植物、烟叶或梨腐烂病菌总RNA的方法，由于该方法向RNA提取试剂中添加了糖原作为核酸沉淀剂，故与同类型试剂相比，核酸的沉降效率大为提高，对组织样品中含量很低的核酸成分亦能够有效分离得到。同时使核酸沉降过程在短时间内即可完成，免除了-20℃沉降数小时的过程，大大缩短了操作时间。该方法适用样品广泛，且比商业化TRIzol试剂更为廉价。样品匀浆后若不立即进行RNA提取可放于-20℃保存至少3天。
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作品专业信息
设计、发明的目的和基本思路、创新点、技术关键和主要技术指标
- 本发明的目的在于克服传统方法样品选择性强、操作繁琐、效率较低等缺点，提供一种分离柑橘类植物、烟叶或梨腐烂病菌总RNA的试剂组合物及其制备方法。本发明的核心是建立一种快速、高效而又廉价的RNA提取方法。该方法适合分离柑橘类植物、烟叶或梨腐烂病菌总RNA的方法，由于该方法向RNA提取试剂中添加了糖原作为核酸沉淀剂，故与同类型试剂相比，核酸的沉降效率大为提高，对组织样品中含量很低的核酸成分亦能够有效分离得到。同时使核酸沉降过程在短时间内即可完成，免除了-20℃沉降数小时的过程，大大缩短了操作时间。该方法适用样品广泛，且比商业化TRIzol试剂更为廉价。样品匀浆后若不立即进行RNA提取可放于-20℃保存至少3天。
科学性、先进性
- 与传统方法相比，此方法无论在操作所需时间，得到的核酸产量和纯度上均有明显优势。由于该方法向RNA提取试剂中添加核算沉淀剂，与同类型实际相比，核酸的沉降效率大为提高，对组织样品中含量何地的核酸成分亦能够有效分离得到。同时使核酸沉降过程在短时间内即可完成，免除了-20℃沉降数小时的过程，大大缩短了操作时间。和商业化得试剂相比，本方法价格更为低廉，更便于大量样品的处理。
获奖情况及鉴定结果
- 无
作品所处阶段
- 中试阶段
技术转让方式
- 专利转让
作品可展示的形式
- 实物、照片、样品
使用说明,技术特点和优势,适应范围,推广前景的技术性说明,市场分析,经济效益预测
- 本发明属于分子生物学方法领域，为一种分离植物或微生物总RNA的试剂组合物及制备方法。试剂以异硫氰酸胍、苯酚为主要成分，以NaCl、MgCl2等提供阳离子，以醋酸钠-醋酸缓冲系统稳定溶液PH，经氯仿简单抽取后，即可得到高质量的RNA。由于本发明的RNA提取实际中中添加核算沉淀剂，与同类型实际相比，核酸的沉降效率大为提高，对组织样品中含量何地的核酸成分亦能够有效分离。使核酸沉降过程在短时间内即可完成，免除了-20℃沉降数小时的过程，大大缩短了操作时间。该方法快捷、高效，适用样品广泛。
同类课题研究水平概述
- 在现代分子生物学研究中， RNA分离已成为许多试验不可或缺的技术手段。分离得到的RNA质量的高低也将直接影响后续试验的进行。而RNA由于其自身的生物学特性，存在易降解、难保存的特点。提取过程中也容易被蛋白质、DNA和其他细胞代谢物污染。因此一种能够分离得到完整高纯度RNA的方法一直是分子生物学工作者所希望实现的目标，其对分子生物学研究亦具有重要意义。 有关RNA的提取方法很多，依据RNA分离原理大致可以分为：密度梯度离心，化学沉降和介质吸附三大类。密度梯度离心法对离心设备要求高，操作繁琐且处理的样品非常有限，已经基本不再使用；化学沉降类方法中主要包括：CTAB法、SDS-酚法、异硫氰酸胍-酸酚-氯仿法。其中CTAB法和SDS-酚法在对植物、真菌等样品的RNA提取中使用较多，其提取原理主要是：利用CTAB、SDS等阴/阳离子去污剂裂解细胞膜，释放核酸，同时抑制RNA酶的活性。Tris-HCl、EDTA缓冲体系维持溶液pH值，稳定核酸。聚乙烯吡咯烷酮（PVP）则能有效与多酚类物质结合，防止其氧化产物——醌类物质对核酸的破坏。随后经乙醇和LiCl两轮沉降得到RNA 。由于LiCl对RNA的沉降具有一定特异性，绝大部分多糖、次生代谢物等杂质便在沉降过程中被除去，从而得到较纯的RNA。该方法在处理富含多糖多酚类复杂样品时仍然可以得到令人满意的结果，然而对于大量样品的处理，此类方法仍嫌繁琐，操作时间也较长。并且CTAB法和SDS-酚法均无法用于动物组织总ＲＮＡ的提取。异硫氰酸胍的应用使这一状况得到改观，由于异硫氰酸胍具有极强的蛋白质变性能力，能够在裂解细胞的同时使RNA酶迅速失活，从而克服了以上方法裂解能力不足的问题，极大地保证了核酸的完整性。异硫氰酸胍-酸酚-氯仿抽提法就是在此基础上发展起来的一种快速分离ＲＮＡ的方法，首先由Chomczynski及其同事于1987报道，并历经数次改进。该方法适用大多数动植物样品，得到的ＲＮＡ完整性好，并可在短时间内完成操作，几乎成为常规ＲＮＡ提取的标准方法，使用也最为广泛。商业化的ＴＲＩｚｏｌ试剂及其分离方法就建立在此基础之上，它比常规的异硫氰酸胍-酸酚-氯仿抽提法更为快捷和高效，然而其价格也较为昂贵，不利于常规大量样品的处理。
