基本信息
- 项目名称：
- 艾叶多糖对小鼠腹腔巨噬细胞内酶活性的影响
- 来源：
- 第十二届“挑战杯”省赛作品
- 小类：
- 生命科学
- 大类：
- 自然科学类学术论文
- 简介：
- 巨噬细胞作为很重要的免疫细胞，不仅参与机体的特异性免疫反应和非特异性免疫反应，而且是两种免疫反应联系的“桥梁细胞”，并作为效应细胞起作用。艾叶资源丰富，经济易得，对其提取物的药理活性研究也逐渐增多，但国内外对艾叶多糖的研究主要集中在抗体活性上，因此，研究艾叶多糖对巨噬细胞的激活作用将具有重要意义。本实验旨在通过细胞化学术研究艾叶多糖对体外巨噬细胞胞内酶的影响。
- 详细介绍：
- 为了研究艾叶多糖对巨噬细胞的活化作用，本文采用水浴回流和乙醇沉淀法提取了艾叶多糖，从小鼠腹腔中分离提取了巨噬细胞。将分离培养7 d后的巨噬细胞分为对照组和多糖组。多糖组分别以终浓度为10µg/mL、100µg/mL和500µg/mL艾叶多糖作用巨噬细胞，对照组用相应体积的水溶媒，于培养箱中培养48 h后行酶化学染色，检测巨噬细胞内酶的活性。图1显示酸性磷酸酶（ACP）染色结果，与对照组比较，各浓度组颜色均加深，且浓度越高颜色越深；图2显示α一醋酸奈酚酯酶（ANAE）染色结果，与对照组比较，各浓度组颜色均加深，且浓度越高颜色越深；图3显示琥珀酸脱氢酶（SDH）染色结果，与对照组比较，低中浓度组颜色无变化，而高浓度组颜色明显加深；图4显示三磷酸腺苷酶（ATPase）染色结果，与对照组比较，各浓度多糖组颜色均无明显变化。由此可见艾叶多糖能增强体外培养巨噬细胞ACP、ANAE、SDH的活性。
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作品专业信息
撰写目的和基本思路
- 文献报道多糖具有提高机体免疫功能的作用，但艾叶多糖在这方面的研究未见有报道。本实验从大鼠腹腔分离提取巨噬细胞，用不同浓度的艾叶多糖作用巨噬细胞，采用细胞酶化学技术定性研究艾叶多糖对巨噬细胞特异性酶，即酸性磷酸酶（ACP），α-醋酸奈酚酯酶（ANAE ）、三磷酸腺苷酶酶（ATPase）以及琥珀酸脱氢酶（SDH）的影响，从而研究艾叶多糖对巨噬细胞的激活作用，旨在研究艾叶多糖提高机体免疫力的药理活性。
科学性、先进性及独特之处
- 本实验采用细胞模型，运用细胞酶化学技术，将分子生物学和形态学相结合形象客观地研究了艾叶多糖对巨噬细胞内酶的激活作用。
应用价值和现实意义
- 本实验结果将从提高巨噬细胞免疫功能角度，说明艾叶的抗肿瘤和抑菌活性，为艾叶的开发和利用提供理论依据。同时，通过对本实验的研究和论文的撰写更好地培养学生的科研能力和创新思维能力，以及撰写学术论文的能力。
学术论文摘要
- 为了研究艾叶多糖对巨噬细胞的活化作用，采用水浴回流和乙醇沉淀法，从艾叶中提取了多糖，以无血清DMEM培养液灌洗小鼠腹腔，分离提取腹腔巨噬细胞，艾叶多糖以不同浓度与体外培养巨噬细胞作用48 h，行细胞酶化学染色，光学显微镜观察巨噬细胞胞内酶的活性变化。结果：艾叶多糖能使巨噬细胞的酸性磷酸酶、α一醋酸奈酚酯酶和琥珀酸脱氢酶的活性明显增强，且与其浓度有关，对三磷酸腺苷酶的活性不增强。结论：艾叶多糖能增强体外培养巨噬细胞的多种胞内酶的活性。
获奖情况
- 2010年12月《艾叶水提物及其分离组分的抑菌活性研究》获黄理工学院大学生科技节科技论文大赛二等奖 《艾叶水提物及分离组分对金黄色葡萄球菌的抑菌活性研究》发表于2010年第六期黄石理工学院学报
鉴定结果
- 艾叶多糖能增强体外培养巨噬细胞的多种胞内酶的活性
参考文献
- 现有技术：1.分离提取原代细胞 2. 原代细胞的体外培养 3. 酶细胞化学染色 技术文献： [1] 谢锦玉.细胞化学方法,鄂征.组织培养[M]，第二版.北京人民卫生出版社,1988:202–240 [2] 赵德来.猪苓多糖和氢化考的松对小鼠腹腔巨噬细胞的作用－细胞化学研究[J].解剖学报，1986，17(2):186–187 [4] 胡庆和，谢锦玉，张莅峡，等.红毛五加多糖对腹腔巨噬细胞作用的定量细胞化学研究[J].中国组织化学与细胞化学杂志，1993，2(3):192–194
同类课题研究水平概述
- 近几十年来，人们发现从植物多糖具有免疫调节、抗肿瘤、抗炎症、抗病毒、抗辐射及降血糖等多种功能,有“生物反应调节剂”之称。植物多糖对机体的特异性和非特异性免疫功能具有增强作用，其激活巨噬细胞是其发挥免疫调节作用的重要途径之一。大量植物多糖能提高巨噬细胞酶类（如SOD、LSZ等）和细胞因子（TNF-a、IL-6、IL-12等）的分泌，从而提高其免疫效应。 巨噬细胞内具有多种胞内和胞外酶，也可分泌一些可溶性因子。溶菌酶（LSZ）是巨噬细胞的一种胞外酶，可在体外溶解细菌[1]。胞内酶中含有细胞的特异性酶，如酸性磷酸酶(ACPase)等。巨噬细胞的运动、吞噬、对抗原的处理及活性物质的分泌均与细胞内酶的活性有关[2-5]。受到刺激的巨噬细胞进一步分化成熟，活力增强，吞噬功能增强，促使细胞内溶菌酶大量增多，细胞胞内多种酶活性显著增强，有效地执行其功能。 有报道称艾叶具有抗癌和抑菌作用。目前我们正参与喻昕院长关于艾叶提取物的抗癌、抗菌项目的研究，证实了艾叶水提物具有抗癌和抑菌的药理活性。项目成员基于文献报道多种植物多糖能提高免疫功能，试图从艾叶的多糖提取物，从提高免疫功能角度，探究艾叶的抗癌抗菌作用。 对于艾叶多糖的研究，国内外对艾叶多糖的药理活性主要集中在抗体活性上。巨噬细胞作为很重要的免疫细胞，外源性活性物质对巨噬细胞的最基本作用就是刺激巨噬细胞，使胞外酶活性增强，同时释放更多的细胞因子。项目研究目的是从巨噬细胞的特异性酶以及多种胞内酶出发，探讨艾叶多糖对巨噬细胞的激活作用。本实验的阳性结果将从提高巨噬细胞免疫功能角度，说明艾叶的抗肿瘤和抑菌活性。同时，通过对本项目研究也能更好地培养我们的科研能力和创新思维能力，以及承担科研项目的能力。
