基本信息
- 项目名称：
- p38 MAPK在CCK-8调控LPS诱导的RAW264.7细胞 IL-1β表达中的作用
- 来源：
- 第十二届“挑战杯”作品
- 小类：
- 生命科学
- 大类：
- 自然科学类学术论文
- 简介：
- 本研究采用ELISA、RT-PCR及Western blot技术检测了八肽胆囊收缩素（CCK-8）对LPS诱导RAW264.7细胞 IL-1β及p38 MAPK磷酸化的影响，旨在探讨CCK-8抗内毒素休克的作用机制。结果发现CCK-8可剂量依赖地抑制LPS诱导的RAW264.7细胞IL-1β蛋白及mRNA的表达，并可能通过抑制 p38 MAPK磷酸化来实现。
- 详细介绍：
- 目的：研究八肽胆囊收缩素（CCK-8）对LPS诱导RAW264.7细胞IL-1β表达的影响及相关机制。方法： 用ELISA及RT-PCR法检测 CCK-8（SB）对LPS诱导RAW264.7细胞 IL-1β蛋白及mRNA表达的影响；应用 Western blot检测 CCK-8对LPS诱导的RAW264.7细胞p38 MAPK磷酸化的影响。结果：①LPS可时间依赖性地诱导RAW264.7细胞IL-1β蛋白及mRNA表达，分别于刺激后6 h及3 h达到高峰；②低剂量（10^-10 mol/L、10^-9 mol/L）CCK-8对LPS诱导的RAW264.7细胞IL-1β表达无明显影响；高剂量（10^-8 mol/L~10^-6 mol/L）CCK-8剂量依赖性抑制了LPS诱导的RAW264.7细胞IL-1β表达；③10-10 mol/L CCK-8未影响LPS诱导的 p-p38 MAPK水平，10^-8、10^-6 mol/L CCK-8剂量依赖性地抑制了LPS诱导的p-p38 MAPK水平；④ p38 MAPK特异性抑制剂SB203580可明显抑制LPS诱导RAW264.7细胞IL-1β表达，与CCK-8共同作用后，抑制作用进一步加强。结论 CCK-8剂量依赖性抑制了LPS诱导的RAW264.7细胞IL-1β蛋白及mRNA表达，并可能通过抑制 p38 MAPK磷酸化而实现的。
作品专业信息
撰写目的和基本思路
- 目的：通过观察CCK-8对LPS诱导的RAW264.7中炎性介质IL-1β及信号分子p38 MAPK表达的影响，探讨CCK-8抗内毒素休克的机制，为CCK-8在临床治疗中的应用提供实验依据。基本思路：应用LPS诱导RAW264.7细胞产生IL-1β，建立内毒素休克细胞模型，观察CCK-8对IL-1β蛋白、mRNA及信号分子p38 MAPK的影响。
科学性、先进性及独特之处
- 本实验设计合理，对各观察指标的时间及量效关系作了深入细致的研究，实验结果具有可重复性，结论可靠。本实验采用细胞培养、ELISA、RT-PCR及Western blot方法和技术对相关指标进行检测，使实验者通过该实验掌握了多种分子生物学技术，使实验者的科研思维能力和动手能力有了很大提高，做到了学研相结合。
应用价值和现实意义
- 本实验设计合理，对各观察指标的时间及量效关系作了深入细致的研究，实验结果具有可重复性，结论可靠。本实验采用细胞培养、ELISA、RT-PCR及Western blot方法和技术对相关指标进行检测，使实验者通过该实验掌握了多种分子生物学技术，使实验者的科研思维能力和动手能力有了很大提高，做到了学研相结合。
学术论文摘要
- 目的：探讨CCK-8抗内毒素休克机制。方法：用ELISA、RT-PCR及Western blot法检测 CCK-8（SB）对LPS诱导RAW264.7细胞 IL-1β及p38 MAPK磷酸化的影响。结果： ①LPS可时间依赖性的诱导RAW264.7细胞IL-1β蛋白及mRNA表达，分别于刺激后6 h及3 h达到高峰；②低剂量CCK-8对LPS诱导的RAW264.7细胞IL-1β表达无明显影响；高剂量CCK-8剂量依赖性抑制了LPS诱导的RAW264.7细胞IL-1β表达；③10^-10 mol/L CCK-8未影响LPS诱导的 p-p38 MAPK水平，10^-8、10^-6 mol/L CCK-8剂量依赖性地抑制了LPS诱导的p-p38 MAPK水平；④ p38 MAPK特异性抑制剂SB203580可明显抑制LPS诱导RAW264.7细胞IL-1β表达，与CCK-8共同作用后，抑制作用进一步加强。结论：CCK-8剂量依赖性抑制了 LPS诱导的RAW264.7细胞IL-1β蛋白及mRNA表达，并可能通过抑制 p38 MAPK磷酸化而实现的。
获奖情况
- 无
鉴定结果
- 无
参考文献
- 1.Keshet Y，Seger R．The MAP kinase signaling cascades: a system of hundreds of components regulates a diverse array of physiological functions[J]．Methods Mol Biol, 2010, 661: 35-38 2.Chen SR, Xu XZ, Wang YH, et al. Icariin Derivative inhibits inflammation through suppression of p38 Mitogen-activated protein kinase and nuclear factor-κB pathways[J]. Biological & pharmaceutical bulletin, 2010,33(8):1307-1313 3.高维娟, 许顺江, 丛斌, 等. CCK-8对大鼠肺间质巨噬细胞cAMP-PKA信号通路的激活作用[J]. 中国药理学通报, 2007,23(3):321-326 4.倪志宇, 李淑瑾, 丛斌, 等.CCK-8对LPS攻击小鼠IL-1β、IL-6、IL-4、IL-10表达的影响[J].中国病理生理杂志, 2007, 23(2): 331-335 5.Mogensen TH. Pathogen recognition and inflammatory signaling in innate immune defenses[J]. Clinical microbiology reviews. 2009, 22(2): 240-2733
同类课题研究水平概述
- 丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）是介导细胞外信号引起细胞核反应的极其重要的信号系统，已证明在哺乳动物中存在四个MAPK成员，即ERK、JNK/SAPK、p38和ERK5/BMK1等MAPK亚族，其中p38 MAPK通路主要对炎性细胞因子和多种类型的细胞应激信号进行转导，大量研究表明阻断p38级联能减轻炎症反应。八肽胆囊收缩素（cholecystokinin octapeptide，CCK-8）属小分子肽类物质，参与调节中枢神经、内分泌、免疫等多系统机能活动。本实验室对CCK-8的系列研究表明，CCK-8具有抗内毒素休克（endotoxin shock，ES）作用。在ES大鼠肺组织及大鼠肺间质巨噬细胞（pulmonary interstitial macrophages，PIMs），CCK-8可通过激活cAMP-PKA信号通路，抑制PKC通路而抑制NF-κB的活性，从而抑制炎症介质的表达，发挥抗ES作用。但CCK-8是否通过p38 MAPK通路调控炎症反应尚未见报道。在参与炎症反应的众多介质中，最有影响的是IL-1β、TNF-α等，与内毒素休克发病和死亡的关系也最为密切。因此本实验通过观察CCK-8对LPS诱导RAW264.7细胞 IL-1β表达的影响及是否与p38 MAPK通路调控有关，探讨CCK-8抗内毒素休克的作用机制。
