基本信息
- 项目名称：
- 怀地黄多糖美容护肤作用的研究
- 来源：
- 第十二届“挑战杯”作品
- 小类：
- 生命科学
- 大类：
- 自然科学类学术论文
- 简介：
- 在“四大怀药”之地黄美容功效的研究中，实验主要通过测定小鼠皮肤羟脯氨酸含量、SOD活性及MDA水平，反映地黄多糖影响的皮肤衰老的机制。另通过研究地黄多糖对小鼠血象、皮肤组织、免疫器官、肝脏及卵巢组织的影响，进一步证明地黄多糖美容功效的科学性。若将实验成果应用于研制、生产美容保健产品，必将会创造出巨大的社会价值和经济效益。
- 详细介绍：
- 摘 要实验目的：研究怀地黄多糖的美容护肤作用实验方法: 取体重20-23g的雌性小鼠30只，随机分为3组，分别灌服大、小剂量的怀地黄多糖混悬液（以0.5%CMC-Na配制成200mg/kg ，100mg/kg； 10mg/ml， 5mg/ml；0.2ml/10g）及同体积的0.5%CMC-Na，每天给药1次，连续给药14天，于第14天给药前将小鼠背部皮肤脱毛（脱毛区面积1cm2），于最后1次给药后2小时，小鼠眼眶取血，一部分全血用于测定血常规，另一部分用1%肝素抗凝。抗凝血按相应试剂盒说明书方法测定红细胞SOD活力，离心后取血浆按相应试剂盒说明书方法测定血浆MDA水平；然后脱颈椎处死小鼠，取小鼠脱毛区皮肤，按相应试剂盒说明书方法测定皮肤中羟脯氨酸含量。再取其胸腺、皮肤组织、肝脏、脾脏、卵巢脏器，10%甲醛固定，经包埋、脱水、切片、染色等流程，制备相应组织切片，对切片进行病理观察。实验结论:由上述实验结果可知，本研究物质可以通过提高皮肤羟脯氨酸含量，增加皮肤弹性，发挥直接的护肤作用；还可以通过升高血超氧化物歧化酶（SOD）活性、降低血过氧化脂（MDA）水平，增强机体免疫力，促进机体造血功能等发挥间接护肤作用。在对皮肤有良好的抗氧化，抗衰老的保护作用的前提下无毒副作用，是皮肤保健品制备上的新创造，其制备成功为怀地黄的开发、应用做出创造性贡献，经济和社会效益巨大。 目 录一、地黄多糖的研究现状…………………………………………3 二、关于地黄多糖美容养颜作用的市场前景调查………………6 调查结果统计与分析…………………………………………7 三、怀地黄多糖美容护肤作用的研究……………………………9 1.实验目的……………………………………………………9 2.实验药品……………………………………………………9 3.实验方法……………………………………………………9 3.1分组给药…………………………………………………9 3.2样品制备及测定方法……………………………………9 4.实验结果……………………………………………………12 5.实验讨论……………………………………………………16 6.实验结论……………………………………………………20 四、 地黄多糖美容护肤产品的前景展望…………………………21 1. 产品背景……………………………………………………21 2. 市场背景……………………………………………………21 3. 产品展望……………………………………………………23 附………………………………………………………………………24 一、地黄多糖的研究现状我省“四大怀药”之一的地黄为玄参科植物地黄（Rehmannia glutinosaLibosch.）的干燥根茎。生地黄具有滋阴清热作用，熟地黄具有补血滋阴、益精填髓的功效，是优良的滋阴补血药，被誉为“壮水之主，补血之君”，广泛用于阴虚、血虚所致的各种疾病。作为地黄中的有效成分之一，地黄多糖近年来倍受广大科研人员的青睐。地黄中含有水苏糖、棉子糖、葡萄糖、甘露三糖、毛蕊花糖、半乳糖及地黄多糖α、地黄多糖β等糖类成分。鲜地黄中水苏糖含量最高,达总糖的64.9%[1],在干地黄中达地黄干重的30%左右。近年来对地黄多糖类化学成分研究较多,李计萍等[2 ]用苯酚- 硫酸比色法对地黄的干品和鲜品还原糖和多糖类成分含量进行比较研究,测出还原糖含量干地黄中为140.3mg/g～287.3mg/g,鲜地黄中为272.3mg/g～467.9mg/g (以干品计算);多糖含量干地黄中为31.3mg/g～50. 5mg/g ,鲜地黄中为90.2mg/g～98.6mg/g (以干品计算),还原糖和多糖的含量都是鲜品比干品高,而六碳糖、蔗糖及三糖含量低于干地黄[3] 。李红霞等[4]采用同样的方法对熟怀地黄的中性多糖进行含量测定,测定波长为483nm,测得多糖含量为65.9mg/g。除以上成分外,Anh 等[5]还从越南地黄根茎中分离出一个新的天然产物2 ,4 - 二甲氧基- 2 - 甲基- 6H - 吡喃- 3 - 酮,并用核磁共振光谱学测定了其结构。随着科技的发展,地黄的化学组成也越来越清楚,但仍有待进一步研究。现将从1989年至今的有关地黄多糖药理学功效的研究整理如下，为我们对地黄多糖的进一步研究奠定了基础。 1. 增强免疫功能和抗肿瘤作用。陈力真等[ 6～9]用地黄多糖α和地黄多糖β进行实验，观察对小鼠T淋巴细胞增殖的影响以及对接种S180瘤细胞小鼠瘤体重量的影响，发现地黄多糖β是地黄中兼具免疫与抑瘤活性的有效成分。进一步研究发现，地黄多糖β可以显著提高小鼠脾脏T淋巴细胞的分泌能力。同时系统研究了抑瘤作用的机理，用含有地黄多糖β的培养液培养S180细胞和HL60细胞，在24h和48h时观察瘤细胞的生长情况。结果表明，地黄多糖β没有直接杀伤瘤株细胞的作用，抑瘤作用与其调动和增强T淋巴细胞的功能密切相关。 2.对造血功能的影响。刘福君等[10～13]经实验发现，地黄多糖可明显促进正常小鼠骨髓造血干细胞（CFU- S）、粒单系祖细胞（CFU- CM）早期红系祖细胞（CFU- E）和晚期红系祖细胞（BFU- E）的增殖和分化，可轻度升高小鼠外周血象中的白细胞数，但对红细胞和血红蛋白数目没有明显的影响。地黄多糖能刺激正常小鼠和快速老化模型小鼠骨髓CFU- S、CFU- CM、CFU- E和BFU- E的增殖和分化，升高外周白细胞，具有促进造血功能的作用。体外对环磷酰胺作用后的小鼠骨髓粒系祖细胞有促进其恢复作用，并对放射性损伤具有保护和促进其恢复的作用。 3.抗衰老作用。苗明三等[14]通过实验测定了熟地黄多糖对衰老模型小鼠血中SOD、CAT、GSH- PX 的影响。实验结果显示，熟地黄多糖可显著提高衰老模型小鼠血中SOD、CAT、GSH- PX活力，降低肝脑匀浆LPO水平，具有抗衰老作用，揭示了熟地黄补益抗衰老的机理。 4.降血糖作用。张汝学等[15]经实验发现，将地黄低聚糖灌胃给药法给药，给药剂量为100 mg/kg，给药15d时，可明显降低四氧嘧啶糖尿病大鼠的血糖值，可使葡萄糖或肾上腺素性高血糖大鼠血糖值部分下降，并回到正常水平，但对肾上腺切除大鼠葡萄糖性高血糖无明显影响，说明其降血糖作用与肾上腺功能有关。 5.中枢抑制作用。崔豪等[16]通过小鼠自发活动实验、抗惊厥实验、镇静催眠实验观察熟地黄及其多糖对中枢的抑制作用。研究结果表明，熟地黄煎液、熟地黄多糖对中枢神经系统具有抑制作用。 6.抗突变活性。梁颖等[17]采用小鼠骨髓嗜多染红细胞微核实验、小鼠骨髓细胞染色体畸变实验、小鼠骨髓细胞姐妹染色单体交换实验方法评价熟地黄多糖的抗突变作用。 另外，关于地黄的提取液的功效研究还有提高对小鼠游泳抗疲劳能力、明显清除自由基的作用[18]和对心脑血管的作用[19]等。由综上可知，地黄多糖的功效日益为人们所知。结合现今研究内容，加之我团队组员的专业及兴趣，我们将研究主题定为地黄多糖，在地黄多糖原有的药理功效基础上开辟比较具有应用价值与经济效益的新功效。 二、关于地黄多糖美容养颜作用的市场前景调查首先感谢各位朋友的协助。本调查的目的在于了解地黄在美容护肤产品中的使用情况，以期对这一市场的发展前景作出初步预测。耽误您宝贵的时间，再次向您致谢。请您就以下问题在您认为合适的地方打“√” 1.您使用护肤产品是因为（未使用的回答第二题） □大家都在用 □保养皮肤 □其他 2.您未使用护肤产品是因为 □价格太高 □怕伤害皮肤 □浪费钱，没必要 □其他 3.使用过程中，您觉得效果如何 □效果很好 □效果一般 □效果很差 4.知道关于地黄的产品吗？ □知道 □了解一些 □了解极少 □不知道 5.您知道地黄在一些中药配方中的作用吗？ □知道 □了解一些 □了解极少 □不知道 6.您使用的护肤产品的成分中，含有地黄的有效成分吗？ □有 □没有 □没有注意过 7.地黄具有抗衰老、抗氧化作用，有很好的护肤功效，你了解过吗？ □知道 □了解一点 □不知道 8.如果用地黄的某些有效成分制成美容护肤品，您认为您会用吗？ □会经常用 □会尝试一下 □会考虑 □不会用 9.请问您现在使用什么样的护肤产品？ □化学制剂化妆品 □中药化妆品 □纯天然植物化妆品 10.您所使用的产品，您是否清楚其中的有效作用成分？ □完全清楚 □清楚一些 □不太清楚 □完全不清楚 11.假如您现在还未使用任何护肤产品，您准备 □想要用 □不太想用 □可以考虑 □以后也不用 12.假如现在有一款新型的含地黄有效成分的美容护肤品，您会怎样决定？ □会大胆尝试一下 □不太感兴趣 □不会选择去用 13.请您将您知道的护肤产品中所含的有效成分写下来： 调查结果统计与分析熟地黄是生地的炮制品，是中医常用的补肝肾、益精血之品，具有补血滋阴、益精填髓的功效，是优良的滋阴补血药，被誉为“壮水之主，补血之君”，广泛用于阴虚、血虚所致的各种疾病。多糖是地黄中有效成分之一，有资料表明，熟地黄多糖具有抗氧化、抗衰老，增强机体免疫功能等作用。为了解市场上中药美容护肤品的行情及地黄应用于美容护肤品的研发是否有市场，特进行了相关市场调查。在调查的过程中发现，大家对中药美容护肤品的了解程度，女性明显高于男性，大部分女性基本都在使用护肤品。然而她们普遍（81.2%）认为她们的大部分美容护肤品并不是她们所期望的那样：既经济实惠，又安全放心。而中药美容护肤品的有效成分均来自纯天然中药，副作用小。所以，对于中药美容护肤品的研发她们倍加关注。此次调查采用调查问卷和现场采访问答的形式，在问卷调查当中，我们通过发放调查问卷1200份，调查的人群包括广大网民、学校周围的市民、校园里的学生等，其中网上调查共发放调查问卷540份，收回有效问卷501份；学校周围市民发放调查问卷320份，收回有效调查问卷320份；校园学生发放调查问卷340份，收回有效调查问卷340份。据第四题在学生调查中的统计结果显示，有60%中医院校学生对地黄的了解已经有了相当的基础，然而在社会当中发现大部分人（78.2%）对地黄的药用功效不清楚。同时，市民和广大学生（62.5%）对地黄护肤品的研发抱有很大期望，表示将来可以尝试。从调查分析得出结论：地黄应用于美容护肤品研发具有很大的市场潜力。一方面，地黄应用于美容护肤品被多数人看好；另一方面，地黄中的有效成分对人体具有保健、美容养颜作用。而其在美容护肤品上的应用还是一项空白，所以，其研发应用具有广阔的市场空间。 三、怀地黄多糖美容护肤作用的研究 1.实验目的：研究怀地黄多糖的美容护肤作用 2.实验药品：本发明物质（地黄多糖），SOD试剂盒、MDA试剂盒、羟脯氨酸试剂盒，均购自南京建成生物工程研究所。 3.实验方法：怀地黄多糖样品由化学实验室提供。 3.1分组给药取体重20-23g的雌性小鼠30只，随机分为3组，分别灌服大、小剂量的怀地黄多糖混悬液（以0.5%CMC-Na配制成200mg/kg ，100mg/kg； 10mg/ml， 5mg/ml；0.2ml/10g）及同体积的0.5%CMC-Na，每天给药1次，连续给药14天。 3.2样品制备及测定方法 3.2.1对小鼠血象水平的影响于最后1次给药后2小时，小鼠眼眶取血，一部分全血用于测定血常规。小鼠取血后在库尔特细胞全自动分析仪（美国Becman公司产品）测定小鼠血液细胞数据，结果是见表1。 3.2.2对小鼠红细胞SOD活力的影响于最后1次给药后2小时，小鼠眼眶取血，一部分用1%肝素抗凝。抗凝血按相应试剂盒说明书方法测定红细胞SOD活力。取采集到的小鼠抗凝血50μl，冲入盛有4ml的生理盐水的带刻度玻璃离心管中，2000转/分离心3分钟。用玻璃吸管也可用针筒接上麻醉针头吸去上清液（要吸干净），留沉淀的红细胞。然后在沉淀的红细胞中加入冷蒸馏水，混匀（使红细胞充分溶解：将溶血液对光观看呈透明状则已充分溶解），加入95％乙醇0.1ml，振荡30秒，再加入三氯甲烷（氯仿）0.1ml置旋涡混匀器充分抽提一分钟，然后3500转/分离心8分钟。离心后溶液分三层：上层为SOD抽提液，中层为血红蛋白沉淀物，下层为三氯甲烷。若上清液中有混浊可加入少量固体NaCl后再离心5分钟，即可澄清。记录上清夜体积（本实验上清夜体积均为0.3ml），取10μl作SOD测定。测定方法按试剂盒操作如下： 试 剂 测 定 管 对 照 管试剂一（ml） 1.0 1.0 样品 （ml） 0.01 蒸馏水（ml） 0.01 试剂二（ml） 0.1 0.1 试剂三（ml） 0.1 0.1 试剂四（ml） 0.1 0.1 用旋涡混匀器充分混匀，置37℃恒温水浴40分钟显色剂（ml） 2 2 混匀，室温放置10分钟，于波长550nm处，1cm光径比色杯，蒸馏水调零，比色。血红细胞中SOD活力计算公式： 血红细胞中SOD活力（U/gHb）= ÷50％×反应液体积 对照管吸光度 × × ÷血红蛋白含量（gHb/ml） 3.2.3对小鼠血浆MDA水平的影响于最后1次给药后2小时，小鼠眼眶取血，一部分用1%肝素抗凝，离心后取血浆按相应试剂盒说明书方法测定血浆MDA水平。小鼠血浆的制备：小鼠眼眶采血后，肝素抗凝，3500 rpm，离心3 min，分离血浆，4°C备用。精密吸取血浆0.2ml作为样品，按试剂盒说明书操作测定血浆LPO水平： 标准管 标准空白管 测定管 测定空白管 10nmol/ml标准品（ml） 0.2 无水乙醇（ml） 0.2 测试样品（ml） 0.2 0.2 试剂1（ml） 0.2 0.2 0.2 0.2 混匀（摇动几下试管架）试剂2（ml） 3 3 3 3 试剂3（ml） 1 1 1 50%冰醋酸（ml） 1 旋涡混匀器混匀，试管口用保鲜膜扎紧，用针头刺1小孔，95℃水浴（或用锅开盖煮沸）40 min，取出后流水冷却，然后3500 rpm，离心10 min，取上清液于532nm波长处，用1cm光径比色杯比色，蒸馏水调零，测各管吸光度值。按下式计算MDA值： 3.2.4对小鼠皮肤羟脯氨酸含量的影响于第14天给药前将小鼠背部皮肤脱毛（脱毛区面积1cm2），眼眶取血后，脱颈椎处死小鼠，取小鼠脱毛区皮肤，按相应试剂盒说明书方法测定皮肤中羟脯氨酸含量。皮肤样本前处理：精确称取组织湿重50mg放入试管中，准确加水解液1ml，混匀。加盖后95℃水浴水解20分钟（水解10分钟混匀一次，目的是使水解更充分）。然后将各试管流水冷却后各管加指示剂1滴，摇匀，再在各管准确加入调PH值的甲液1.0ml，混匀（此时溶液应为红色）；之后用200µl的加样器吸取调PH值的乙液向各管内逐滴小心加入调PH值的乙液，每滴加入后要混匀，直至液体中指示剂的颜色变成黄绿色。此时PH值在6.0～6.8左右（约加入调PH值的乙液100µl～500µl左右）；然后加蒸馏水至10ml，混匀；取4ml稀释的水解液加适量活性炭25mg，混匀，3500rpm离心10分钟，小心取上清液1ml作检测。接下来按以下表格操作： 空白管 标准管 测定管蒸馏水（ml） 1.0 5µg/ml标准应用液（ml） 1.0 检测液（ml） 1.0 试剂一（ml） 0.5 0.5 0.5 混匀，静置10分钟试剂二（ml） 0.5 0.5 0.5 混匀，静置5分钟试剂三（ml） 0.5 0.5 0.5 计算公式： 羟脯氨酸含量 = ×标准管含量× （µg/mg湿重） (5µg/ml) 3.2.5组织样品处理去小鼠脱毛区皮肤后，再取其胸腺、皮肤组织、肝脏、脾脏、卵巢脏器，10%甲醛固定，经包埋、脱水、切片、染色等流程，制备相应组织切片，对切片进行病理观察。（实验结果由病理室提供） 4.实验结果： 4.1对小鼠血象水平的影响 表1 地黄多糖对雌性正常小鼠血象的影响（ ±s）组别 动物数（n） 剂量（mg/kg） WBC(109/L) RBC(1012/L) HGC(g/L) PLT(109/L) 生理盐水组 10 3.47±1.30 9.42±0.81 138.4±5.7 216.5±16.4 大剂量地黄多糖组 10 200 4.15±0.94 10.73±1.09＊＊ 141.9±5.3 295.5±18.4＊＊小剂量地黄多糖组 10 100 3.56±0.70 9.56±0.93＊＊ 144.0±7.0 246.9±31.1＊＊ **表示与生理盐水组比P <0.01 从上表可看出，大、小剂量地黄多糖组均可显著升高雌性小鼠血红细胞水平（P <0.01），可显著升高雌性小鼠血小板水平（P <0.01），也有升高血红蛋白的趋势。提示地黄多糖对雌性小鼠有很好的补血作用，血液生成旺盛，使气色好利于美容。 4.2对小鼠红细胞SOD活力、血浆MDA水平、皮肤羟脯氨酸含量的影响表2 地黄多糖对雌性小鼠血MDA、SOD及皮肤羟脯氨酸的影响（ ±s）组别 动物数(n) 剂量（mg/kg） MDA（nmol/ml） SOD（U/gHb） 皮肤羟脯氨酸（ug/mg湿重）生理盐水组 10 52.19±6.36 36.73±2.32 1.98±0.24 大剂量地黄多糖组 10 200 15.58±8.11＊＊ 42.33±1.49＊＊ 2.29±0.31＊＊小剂量地黄多糖组 10 100 19.03±2.45＊＊ 41.27±1.74＊＊ 2.12±0.04＊＊ **表示与生理盐水组比P <0.01 从上表可看出，大、小剂量地黄多糖组均可显著升高雌性小鼠血超氧化物歧化酶活力和皮肤羟脯氨酸含量（P <0.01），可显著降低血过氧化脂水平（P <0.01）。提示地黄多糖对雌性小鼠有很好的抗氧化、抗衰老作用；使皮肤中羟脯氨酸含量增高，提示皮肤胶原含量增多，抗皮肤衰老。 4.3对小鼠胸腺、脾脏组织的影响生理盐水组实验动物胸腺小叶分叶清、皮质髓质分界清楚，生理盐水组脾脏红白髓分界清楚，脾窦、脾小结构正常；地黄多糖小剂量组胸腺小叶分叶清，胸腺皮质变薄，淋巴细胞密度未改变；地黄多糖小剂量组脾脏红白髓质分界清，脾小叶体积明显增大。地黄多糖大剂量组胸腺小叶分叶清，胸腺皮质增厚，淋巴细胞密度增大；地黄多糖大剂量组脾脏红白髓分界清，脾小结稍有增大。提示地黄多糖可促进胸腺、脾脏体积增大、淋巴细胞数增多。 表3 地黄多糖对雌性小鼠胸腺及脾脏组织形态的影响（ ±s）组别 动物数（n） 剂量（mg/kg） 胸腺皮质（um） 淋巴细胞数（个） 脾小结大小（um） 淋巴细胞数（个）生理盐水组 10 26.76±8.12 43.19±5.46 19.27±5.28 24.39±5.36 大剂量地黄多糖组 10 200 30.43±7.38 48.76±9.52＊＊ 26.17±5.12＊＊ 31.46±4.20＊＊小剂量地黄多糖组 10 100 17.56±4.26 26.53±3.16 28.23±7.34＊＊ 34.12±4.56＊＊ **表示与生理盐水组比P <0.01，*表示与生理盐水组比P <0.05 从上表可看出，大剂量地黄多糖组可明显升高雌性小鼠胸腺淋巴细胞数（P <0.05），有增加胸腺皮质厚度的趋势；大、小剂量地黄多糖组均可使脾小结显著增大、脾小结淋巴细胞数显著增多（P <0.01）。提示地黄多糖对雌性小鼠有好的促进免疫器官的发育、提高机体免疫功能、抗衰老作用。 4.4对小鼠肝脏组织的影响生理盐水组肝脏、肝小叶、肝细胞及肝细胞索、肝窦均正常；地黄多糖小剂量组肝小叶、肝细胞及肝细胞索、肝窦均正常；地黄多糖大剂量组肝小叶、肝细胞索、肝细胞、肝窦均正常。提示地黄多糖可增强肝细胞增生分裂的作用。 表4 地黄多糖对雌性小鼠肝细胞增生分裂的影响（ ±s）组别 动物数（n） 剂量（mg/kg） 0～3 4～5 6～7 8～9 生理盐水组 10 0 4 5 1 大剂量地黄多糖组 10 200 0 1 2 7 小剂量地黄多糖组 10 100 4 6 0 0 经Ridit检验，与生理盐水组比，大剂量地黄多糖组可明显促进雌性小鼠肝细胞增生分裂（P<0.05），小剂量地黄多糖组可显著促进雌性小鼠肝细胞增生分裂（P<0.05）；提示地黄多糖促进机体细胞增生、使机体代谢旺盛。 4.5对小鼠皮肤组织的影响生理盐水组皮肤的上皮层、皮下组织、腺体、肌层均正常；地黄多糖小剂量组皮肤上皮、皮下腺体增大，腺细胞增多；地黄多糖大剂量组上皮、皮下腺体部分增大，细胞增多。提示地黄多糖可促进皮肤腺体细胞增生的作用。 表5 地黄多糖对雌性小鼠皮下腺增生的影响（ ±s）组别 动物数（n） 剂量（mg/kg） 1～5 6～10 11～15 16～20 生理盐水组 10 10 0 0 0 大剂量地黄多糖组 10 200 2 2 6 0 小剂量地黄多糖组 10 100 6 4 6 0 经Ridit检验，与生理盐水组比，小剂量地黄多糖组可显著促进雌性小鼠皮下腺的增生（P<0.01），大剂量地黄多糖组有促进雌性小鼠皮下腺增生的趋势；提示地黄多糖有促进皮肤腺体细胞的生成、促进皮下腺的生成，有利于皮肤的美容。 4.6对小鼠卵巢组织的影响生理盐水组卵巢的各级卵泡及黄体均正常；地黄多糖小剂量组卵巢各级卵泡、黄体均正常；大剂量组卵巢各级卵泡、黄体均正常。 表6 地黄多糖对雌性小鼠卵巢组织形态的影响（ ±s）组别 动物数（n） 剂量（mg/kg） 卵巢卵泡个数 卵巢黄体个数 比值生理盐水组 10 17.25±10.30 2.50±0.50 0.145 大剂量地黄多糖组 10 200 22.33±11.43 2.33±2.72 0.104 小剂量地黄多糖组 10 100 29.00±2.38 1.00±0.01 0.035 通过卵泡个数与黄体个数比值，可以看出，比值越小说明雌激素分泌越强，反之，比值越大，雌激素分泌减少。从上表可看出，地黄多糖有一定促进雌激素分泌作用；使卵巢卵泡数增加，雌激素功能增强，有利于美容。 5.实验讨论： (1) 中医理论认为：血液运行全身，内至五脏六腑，外达皮毛肋骨，血液对各脏腑组织器官起着营养和滋润的作用。如：“肝受血而能视，足受血而能步，掌受血而能握，指受血而能摄。”皮肤是人体器官的重要组成部分，皮肤同样需要血液的营养。因此我们说：血液才是营养健美肌肤的真正源泉。事实上，没有任何一种化妆品，能像血液一样供给肌肤细胞可以直接吸收和利用的全营养素、各种维生素、结合态的氧、源源不断的水分、各种微量元素、生长因子、抗体及几千种活性酶。同时血液还将对人体有害的二氧化碳、乳酸等代谢产物带走。肌肤细胞就是通过血液的营养来维持其正常的生理功能，进行正常的新陈代谢，此时肌肤细胞才会健康、洁净，变得充盈饱满，富有生机活力而呈现健康之美。然而，若是血液虚亏，皮肤就会松弛，就会出现干燥，失去光泽、弹性。而血液的充盈，在现代医学则体现在血象（血细胞形态、数量、比例和血红蛋白含量的测定称为血象）水平上。血象水平高，则血液生成旺盛：反之亦然。从上述实验结果可以看出：大、小剂量地黄多糖组均可显著升高雌性小鼠血红细胞水平、血小板水平，且血红蛋白含量也有升高的趋势。故可认为，地黄多糖对小鼠有很好的促进血液生成作用。而于人体来说，地黄多糖则有一定的护肤美容作用。 (2)机体的衰老与体内氧自由基的产生与积累密切相关，年龄的增长和某些体外因素会造成机体和皮肤组织自由基产生超过机体正常清除自由基的能力，而超氧化物歧化酶（SOD）可清除人体内过多的有害的氧自由基，因而可以延缓衰老。过氧化脂质，如丙二醛（MDA），是不饱和脂肪酸经自由基作用所形成的过氧化物。过氧化脂质和氧自由基有破坏生物膜、核糖核酸和脱氧核糖核酸的作用，超氧化物歧化酶与其及氧自由基等指标和衰老有关。超氧化物歧化酶活性越高，其清除自由基的能力越强，过氧化脂质水平越低，则人体的抗衰老能力越强。上述结果表明：大、小剂量地黄多糖组均可显著升高雌性小鼠超氧化物歧化酶活性，降低血过氧化水平。故可认为地黄多糖对小鼠有很好的抗氧化、抗衰老作用。而这对于人体来说，在一定程度上，结果也是肯定的。（3）羟脯氨酸是胶原蛋白特有的氨基酸之一，在真皮内含量丰富且比较稳定，它的含量可以间接反映真皮内胶原蛋白含量的变化，而胶原蛋白的含量可以提示皮肤的衰老程度。按照交联理论，当人体衰老时，脯氨酰羟化酶活性降低，引起脯氨酸羟化作用下降，导致羟脯氨酸含量降低，进而影响胶原蛋白的合成，使真皮变薄，这会降低人体皮肤的质量。胶原蛋白被称为“骨中之骨，肤中之肤，肉中之肉”。在人体皮肤成分中，有70%是由胶原蛋白所组成。而当胶原蛋白不足时，不仅皮肤及骨骼会出现问题，对内脏器官也会产生不利影响。也就是说，胶原蛋白是维持身体正常活动所不可缺少的重要成分。同时也是使身体保持年轻、防止老化的物质。另外，胶原蛋白还可以预防疾病，改善体质，对美容和健康都很有帮助。由上述结果可以看到：大、小剂量地黄多糖组均可显著升高雌性小鼠皮肤羟脯氨酸含量。这表示皮肤胶原蛋白含量增加，其抗衰老的作用增强。（4）卵泡开始发育时，只分泌少量雌激素；至月经第7日卵泡分泌雌激素量迅速增加，于排卵前形成高峰，排卵后稍减少。约在排卵后1～2日，黄体开始分泌雌激素使血循环中雌激素又逐渐上升（注：为黄体生成素的作用）。约在排卵后7～8日黄体成熟时，形成血循环中雌激素第二高峰，此峰低于排卵前第一高峰。雌激素是一类有广泛生物活性的类固醇化合物，其分泌可以滋润皮肤、亮丽头发。皮肤有许多雌激素受体，青春的焕发使皮肤饱满、水润、有光泽，这明显的得益于雌激素的大量分泌。而随着年龄的增长，雌激素的分泌会逐渐减少，且会引起皮肤的很大变化:皱纹、色斑……所以，雌激素在美容护肤方面具有重要的作用。上述实验表明：大、小剂量地黄多糖组卵巢各级卵泡、黄体均正常。通过卵泡个数与黄体个体比值，可以看出，比值越小、雌激素越强；比值越大，雌激素分泌减少。而且，通过上述实验结果可以看出，地黄多糖可使卵巢卵泡增加，有一定促进雌激素分泌作用。故可以认为这是地黄多糖抗衰老、美容护肤作用的体现。（5）皮肤指身体表面包在肌肉外面的组织，是人体最大的器官，主要承担着保护身体、排汗、感觉冷热和压力的功能。皮肤覆盖全身，它使体内各种组织和器官免受物理性、机械性、化学性和病原微生物性的侵袭。而与抗衰老相关的腺体组织则主要是皮下腺体、腺细胞：皮下腺体越大，腺细胞越多，其分泌的皮脂越多。皮脂会在皮肤上形成一层膜，这层膜呈弱酸性，对皮肤来说是天然的面霜，具有很好的保护作用。皮脂膜有锁住水分的作用，不使皮肤中水份流失到空气中，这都体现了其良好的护肤作用。上述结果显示，地黄多糖小剂量组皮肤上皮、皮下腺体增大，腺细胞增多;大剂量组皮肤上皮、皮下腺体部分增大，腺细胞增多。无疑，这个结果提示地黄多糖可促进皮肤腺体细胞的增生，也就是说其有相应的护肤作用。（6）关于人体的免疫功能，中医的典籍早有论述：“正气内存、邪不相干”，而免疫功能会随人类年龄的增长而衰退。人体的免疫器官包括胸腺、脾脏及淋巴结，和其它器官一样，系统功能亦会随年龄增长而衰退。最明显的例子是胸腺，这个位于胸骨后的免疫器官，在婴幼儿时期体积最大，其后会渐渐缩小，到六十岁时差不多完全萎缩并丧失功能。而脾脏也是如此，只是表现的不太明显。所以说，只要能使人体的免疫功能维持在一定阶段。就可以延缓人体衰老。由上述实验结果可知：大、小剂量地黄多糖组均可显著升高雌性小鼠胸腺淋巴细胞，有增加胸腺皮质厚度的趋势；也会使脾小结显著增大、脾小结淋巴细胞数显著增多。这提示地黄多糖对雌性小鼠有好的促进免疫器官的发育、提高机体免疫功能、抗衰老作用。故对于人体来说，在这些方面，则应该会产生相似的结果、作用。（7）肝脏的护肤作用应该说是通过谷胱甘肽的作用来体现的，谷胱甘肽的主要生理功能是抗自由基、抗衰老、抗氧化。机体产生的过多自由基会损伤生物膜，侵袭生命大分子，促进机体衰老，谷胱甘肽可消除自由基，能起到强有力的保护作用，延缓机体衰老。谷胱甘肽不仅能消除自由基还可以提高人体免疫力，谷胱甘肽在老人迟缓化细胞上所发挥的功效比年轻人大，所以对于衰老的免疫系统，其可维持之。谷胱甘肽在肝脏细胞中的含量相对来说是很高的，所以肝细胞数目的增加，可增强人体的抗衰老作用。上述实验结果显示，地黄多糖可促进体细胞的增殖，故可以说，地黄多糖可以增强机体的抗衰老作用。 6.实验结论由上述实验结果可知，本研究物质可以通过提高皮肤羟脯氨酸含量，增加皮肤弹性，发挥直接的护肤作用；还可以通过升高血超氧化物歧化酶（SOD）活性、降低血过氧化脂（MDA）水平，增强机体免疫力，促进机体造血功能等发挥间接护肤作用。在对皮肤有良好的抗氧化，抗衰老的保护作用的前提下无毒副作用，是皮肤保健品制备上的新创造，其制备成功为地黄的开发、应用做出创造性贡献，经济和社会效益巨大。 四、地黄多糖美容护肤产品的前景展望 1.产品背景 中国美容护肤保健品营销市场是一个充满活力的市场，跨国企业的大举进入，本土企业的崛起，使这个行业更加变化多端：产品结构变化，市场更加细分，概念日渐翻新，化妆品营销也各有高招。中草药一直普遍被认为是中药产品的原材料，然而将中草药有效成分融入护肤品当中，可以对肌肤起到独特的功效，针对这一特点，含有中草药成分的美容保健品应运而生。所谓的中药美容保健品是指以中医药理论为指导，由中药制成或是在化学合成物质中添加中药或中药成分而成，具备清洁身体、美化外表、改变外貌、增加吸引力作用的物质。随着生活水平的不断提高，人们越来越注意护肤品的环保性、安全性、天然性，所以，代表大自然的颜色——绿色，就成为“安全健康”的代名词。而中药美容保健品是由从中草药及天然植物中提取的有效成分制成的保健品。中药美容护肤品遵循自然环境和人类的可持续发展要求，满足人们对高质量生存方式的追求，顺应人们个性化和多样性消费的潮流和“绿色”及“人类回归自然”的潮流。“天然”“无添加”的美容护肤品风潮，无疑是给了中药美容护肤品一个实现飞跃发展的机遇。于是，我们的含地黄多糖的中药美容护肤品就应运而生。 2.市场背景 在产品投放初期，我们将在河南市场致力于公司的发展，因此，我们将重点对河南市场进行描述。（1）人口 2008年底，河南省的总人口9918万人，较上年的自然增长率为4.97%。全省每年出生人口近120万，净增约50万人，相当于增加一个中等县的人口。按照这样一个增长速度，2009年河南总人口大约9970万，到2010年下半年，我省将成为中国第一个人口超亿的省份。 （2）地域交通 河南省位于全国心脏部位，优越的交通运输条件使河南成为全国重要的交通运输枢纽。河南省地处全国路网中心，4条铁路支线在境内交汇，形成了纵横交错、四通八达的铁路网。拥有亚洲最大的列车编组站和全国最大的零担货物转运站，一类航空、铁路口岸和公路二类口岸各1个，邮政电信业务量位居全国前列。便捷的地域交通将给我们公司的物流、经营带来极大的便利。（3）居民生活水平 刚刚过去的2010年，我省城镇居民人均可支配收入突破万元大关，达到11477.05元。国家统计局河南调查总队最新调查显示，这一数据比上年同期增长了17.0%，扣除价格因素后实际增长11.0%。分析认为，支撑我省城镇居民可支配收入增长的要素主要是工薪收入、转移性收入、财产性收入和个体经营净收入的快速稳定增长。另外，我省居民收入稳定增长，消费需求逐渐升温，同时消费结构向质量型转化，人均消费额为890元，增长了12%，其中医疗保健的消费比例呈明显上升趋势。（4）消费心理及行为 一直以来，在大家心目中，中药都是我国人民几千年来防病治病的工具，也是中华民族的优秀文化遗产。河南是许多中草药的故乡，也是“医圣”张仲景的故乡，同时拥有一大批如宛西，羚锐等优秀的中药企业和河南中医学院等专业学术科研机构，为中医药市场奠定了深厚的文化底蕴，消费者从心理上对中药的认可程度比较高，正是这优势才使我省中药在经历历史的冲刷后仍能延续至今并保持强盛的生命力。据省内相关调查，总体情况下消费者倾向于选择中药。 3.产品展望 经初步研究，怀地黄多糖制品（口服）通过降低血过氧化脂（MDA）水平、增强血超氧化物歧化酶（SOD）活力、增强机体免疫力、促进机体造血功能等内部调理方式，从而起到美容护肤作用。还可提高皮肤羟脯氨酸含量，增加皮肤弹性，发挥直接的护肤作用。其口服内用，可滋阴补血、增强免疫力、抗衰老，使人面色红润、有光泽，同时促进皮肤生发层细胞分裂增生。并且可制成多种剂型，如口服液、片剂、胶囊剂、膏剂等，目前片剂、胶囊剂以其口感好、携带方便而备受消费者亲睐。至于怀地黄多糖制品能否外用，尚需进一步研究。地黄多糖美容产品依靠其良好的效果，再加上产品形式选择范围广，可根据消费者需要设计成多种剂型，具有极好的前景。
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撰写目的和基本思路
- 目的：在怀地黄多糖原有的药理功效的基础上开辟比较具有应用价值与经济效益的新功效。基本思路：通过测定地黄多糖实验组小鼠皮肤羟脯氨酸含量、SOD活性、MDA水平，及观察怀地黄多糖对小鼠血象、免疫器官、皮肤组织及代谢器官的影响，总结出怀地黄多糖美容护肤的功效。
科学性、先进性及独特之处
- 羟脯氨酸是胶原蛋白特有的氨基酸之一，其含量可反映皮肤胶原蛋白含量。机体衰老与体内氧自由基的产生与积累密切相关，SOD可清除人体内过多有害氧自由基，因而可以延缓衰老。MDA与氧自由基等指标有关。研究血象、皮肤组织本身、免疫组织及卵巢与皮肤美容均有联系，充分说明了本实验的科学先进之处。在怀地黄功效的研究中，美容功效的研究目前还是空白，开辟怀地黄多糖美容功效并取得一定成效是我们实验的独特之处。
应用价值和现实意义
- 实际应用价值：结合怀地黄多糖美容功效，开发出一系列怀地黄多糖的美容护肤品，有好的社会和经济价值。现实意义：进一步阐明了怀地黄多糖的美容护肤作用，开辟了怀地黄的新功效，新用途。
学术论文摘要
- 实验目的：研究怀地黄多糖的美容护肤作用实验方法: 取体重20-23g的雌性小鼠30只，随机分为3组，分别灌服大、小剂量的怀地黄多糖混悬液（以0.5%CMC-Na配制成200mg/kg ，100mg/kg； 10mg/ml， 5mg/ml；0.2ml/10g）及同体积的0.5%CMC-Na，每天给药1次，连续给药14天，于第14天给药前将小鼠背部皮肤脱毛（脱毛区面积1cm2），于最后1次给药后2小时，小鼠眼眶取血，一部分全血用于测定血常规，另一部分用1%肝素抗凝。抗凝血按相应试剂盒说明书方法测定红细胞SOD活力，离心后取血浆按相应试剂盒说明书方法测定血浆MDA水平；然后脱颈椎处死小鼠，取小鼠脱毛区皮肤，按相应试剂盒说明书方法测定皮肤中羟脯氨酸含量。再取其胸腺、皮肤组织、肝脏、脾脏、卵巢脏器，10%甲醛固定，经包埋、脱水、切片、染色等流程，制备相应组织切片，对切片进行病理观察。实验结论:由上述实验结果可知，本研究物质可以通过提高皮肤羟脯氨酸含量，升高SOD活性、降低MDA水平，增强机体免疫力，促进机体造血功能等发挥美容护肤作用。
获奖情况
- 无
鉴定结果
- 无
参考文献
- ［1］ 李红霞,许闵,孟江,等. 怀地黄多糖的含量测定[ J ] . 河南科学,2002 ,20 (2) :144 - 146. ［2］陈力真，冯杏婉，顾国民，等.地黄免疫抑瘤活性成分的分离提取与药理作用［J］.中国中药杂志，1993，18（8）：502- 505. ［3］ Tomoda M ,Kato S ,OnumaM. Water - soluble constituent s of Re2hmanniae Radix. I. Carbohydrates and acids of Rehmannia gluti2nosa f . hueichingensis[J ] . Chem Pharm Bull ,1971 ,19 (7) :1455 -1460. ［4］ 李计萍,马华,王跃生,等. 鲜地黄与干地黄中梓醇、糖类成分含量的比较[J ] . 中国药学杂志,2001 ,32 (5) :300 - 302. ［5］陈力真，冯杏婉，周金黄，等.地黄多糖b 的免疫抑瘤作用及其机理［J］.中国药理学与毒理学杂志，1993，7（2）153- 156. ［6］苗明三，孙艳红，方晓艳. 熟地黄多糖抗氧化作用［J］. 中国中医药信息杂志，2002，9（10）：32- 33.
同类课题研究水平概述
- 1. 增强免疫功能和抗肿瘤作用。陈力真等用地黄多糖α和地黄多糖β进行实验，观察对小鼠T淋巴细胞增殖的影响以及对接种S180瘤细胞小鼠瘤体重量的影响，发现地黄多糖β是地黄中兼具免疫与抑瘤活性的有效成分。进一步研究发现，地黄多糖β可以显著提高小鼠脾脏T淋巴细胞的分泌能力。同时系统研究了抑瘤作用的机理，用含有地黄多糖β的培养液培养S180细胞和HL60细胞，在24h和48h时观察瘤细胞的生长情况。结果表明，地黄多糖β没有直接杀伤瘤株细胞的作用，抑瘤作用与其调动和增强T淋巴细胞的功能密切相关。 2.对造血功能的影响。刘福君等经实验发现，地黄多糖可明显促进正常小鼠骨髓造血干细胞（CFU- S）、粒单系祖细胞（CFU- CM）早期红系祖细胞（CFU- E）和晚期红系祖细胞（BFU- E）的增殖和分化，可轻度升高小鼠外周血象中的白细胞数，但对红细胞和血红蛋白数目没有明显的影响。地黄多糖能刺激正常小鼠和快速老化模型小鼠骨髓CFU- S、CFU- CM、CFU- E和BFU- E的增殖和分化，升高外周白细胞，具有促进造血功能的作用。体外对环磷酰胺作用后的小鼠骨髓粒系祖细胞有促进其恢复作用，并对放射性损伤具有保护和促进其恢复的作用。 3.抗衰老作用。苗明三等通过实验测定了熟地黄多糖对衰老模型小鼠血中SOD、CAT、GSH- PX 的影响。实验结果显示，熟地黄多糖可显著提高衰老模型小鼠血中SOD、CAT、GSH- PX活力，降低肝脑匀浆LPO水平，具有抗衰老作用，揭示了熟地黄补益抗衰老的机理。 4.降血糖作用。张汝学等经实验发现，将地黄低聚糖灌胃给药法给药，给药剂量为100 mg/kg，给药15d时，可明显降低四氧嘧啶糖尿病大鼠的血糖值，可使葡萄糖或肾上腺素性高血糖大鼠血糖值部分下降，并回到正常水平，但对肾上腺切除大鼠葡萄糖性高血糖无明显影响，说明其降血糖作用与肾上腺功能有关。 5.中枢抑制作用。崔豪等通过小鼠自发活动实验、抗惊厥实验、镇静催眠实验观察熟地黄及其多糖对中枢的抑制作用。研究结果表明，熟地黄煎液、熟地黄多糖对中枢神经系统具有抑制作用。 6.抗突变活性。梁颖等采用小鼠骨髓嗜多染红细胞微核实验、小鼠骨髓细胞染色体畸变实验、小鼠骨髓细胞姐妹染色单体交换实验方法评价熟地黄多糖的抗突变作用。
