基本信息
- 项目名称：
- 新型食物过敏原酶联免疫检测方法的探讨
- 来源：
- 第十二届“挑战杯”省赛作品
- 小类：
- 生命科学
- 大类：
- 科技发明制作A类
- 简介：
- 我们的研究是对传统的间接ELISA法进行了改良，以特异性抗原包被反应板、以酶标特异性抗原代替间接ELISA法中的酶标记抗人IgE，构建双抗原夹心一步法检测食物过敏原，研究一种简便、准确快速、特异性高，适用范围广的新型食物过敏原酶联免疫检测法。我们以检测牛奶过敏原为例，用包被的β-LG和酶标记的β-LG构建双抗原夹心法，捕获患者血清中的过敏特异性抗体。研制出新型牛奶过敏原快速检测试剂盒。
- 详细介绍：
- 目前鉴别过敏原有体内试验和体外实验。体内试验主要就是皮肤针刺试验，体外检测方法主要有放射性变应原吸附试验(RAST)、CAP变应原检测系统及ELISA。但各方法均存在各自的缺陷。我们的研究是在ELISA基础上，对传统的ELISA进行改良，研究一种简便、准确快速、特异性高，适用范围广的新型食品过敏原酶联免疫检测法，克服传统ELISA的缺陷，以便于过敏原检测的广泛开展。 本方法以包被的β-LG（特异性抗原）包被反应板和酶标记的β-LG构建双抗原夹心法，捕获患者血清中的过敏特异性抗体，检测牛奶过敏原。检测模式为一步法（见图1）。同时检测一批牛奶过敏阳性血清和对照血清，计算该检测方法的灵敏度和特异度，考察试验方法同进口试剂盒检测结果的符合率。以天津市儿童医院检验科牛奶过敏原标本为例进行ELISA测定，并与美国ASI公司IVT过敏原体外检测试剂盒确诊的结果进行比较以判断特异度和灵敏度。通过使用双抗原夹心法测定由天津市儿童医院检验科提供的40份过敏原血清以及四十份正常血清样本，与美国ASI公司IVT过敏原体外检测试剂盒检测出的金标准比较，计算得出双抗原夹心法的灵敏度为82.5%,特异度为95%，阳性预测值（+PV）为94.3%,阴性预测值（-PV）为84.4%。 综合考虑，该方法具有广泛的推广使用性。本方法有较好的灵敏性、稳定性、特异性、重复性和较好检测范围，技术简便、成本较低，适合于大规模样本的检测，有利于基层医院临床应用的推广。
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作品专业信息
设计、发明的目的和基本思路、创新点、技术关键和主要技术指标
- 目的：目前鉴别过敏原有体内试验和体外实验。体内试验主要就是皮肤针刺试验，体外检测方法主要有放射性变应原吸附试验(RAST)、CAP变应原检测系统及ELISA。但各方法均存在各自的缺陷。我们的研究是在ELISA基础上，对传统的ELISA进行改良，研究一种简便、准确快速、特异性高，适用范围广的新型食品过敏原酶联免疫检测法，克服传统ELISA的缺陷，以便于过敏原检测的广泛开展。 基本思路：本方法以包被的β-LG（特异性抗原）包被反应板和酶标记的β-LG构建双抗原夹心法，捕获患者血清中的过敏特异性抗体，检测牛奶过敏原。检测模式为一步法（见图1）。同时检测一批牛奶过敏阳性血清和对照血清，计算该检测方法的灵敏度和特异度，考察试验方法同进口试剂盒检测结果的符合率。以天津市儿童医院检验科牛奶过敏原标本为例进行ELISA测定，并与美国ASI公司IVT过敏原体外检测试剂盒确诊的结果进行比较以判断特异度和灵敏度。 项目的关键问题及技术指标：1.探索最佳反应浓度。使用美国沃克公司提供的β-LG包被微孔板。通过实验摸索出最佳包被浓度，以求达到最佳的反应效果。2.酶标记抗原过程中的相关问题。传统ELISA是使用酶标二抗，而我方法采用酶标记抗原，需要注意标记过程中产生的一系列问题。
科学性、先进性
- 我们的研究是在ELISA基础上，对传统的ELISA法进行了改良，以特异性抗原包被反应板、以酶标特异性抗原代替间接ELISA法中的酶标记抗人IgE，构建双抗原夹心一步法检测食物过敏原。 本实用新型为基于双抗原夹心法的食物过敏检测方法，改变传统的间接ELISA法检测模式。以牛奶过敏原为例，用牛奶过敏原分别包被微孔板和标记辣根过氧化物酶制成酶标抗原，用于识别和捕获患者血清中的牛乳过敏特异性抗体，再通过催化底物显色来判断结果。 与现有检测方法相比，本检测方法具有如下特点：1.双抗原夹心法检测采用了两步特异性反应，避免了传统间接法ELISA中酶标二抗识别IgE缺乏针对性的缺点，使特异性得到很大提高，极大地提高了结果的准确性。2．利用双抗原反应的高特异性，可检测出由过敏产生的任何类型抗体，克服了间接法中只识别IgE型抗体的缺点，提高检出率。3.测量时血清不需稀释，可减少因标本稀释带来的误差。4.只需一步孵育反应，简便快捷，省时省力，适合批量筛查。
获奖情况及鉴定结果
- 无
作品所处阶段
- 实验室阶段
技术转让方式
- 无
作品可展示的形式
- 实物、产品，图片，录像，样品，宣传册
使用说明,技术特点和优势,适应范围,推广前景的技术性说明,市场分析,经济效益预测
- 使用说明：在包被了β-LG的微孔中加入10μl的血清原液和100μl的酶标记β-LG，37 ℃孵育1 hour，洗板5次拍干后加入显色液A、B各50μl，室温避光反应15min，后加入终止液，以620nm为参考波长，测定450nm处的吸光度（A450）。 特点及优势：其特征是反应的原理为双抗原夹心法而非间接法，不需要酶标抗体而使用酶标记抗原，用于包被的抗原和用于标记酶的抗原为同一过敏原。 适用范围及推广前景：过敏原筛查是过敏性疾病诊断治疗的中心环节。其中双抗原夹心用于过敏原筛查尚未见报道，该方法具有较高特异性，适合于大规模样本的检测。 市场效益和经济预测：项目推广将打破进口试剂的垄断地位，对开发具有当地特色过敏原诊断试剂具有重要意义，经济效益可观。 本方法仅以牛奶过敏原为例进行探讨，随着研究的深入，还可对其他常见食物过敏原进行检测，具有很大的市场应用前景。
同类课题研究水平概述
- 目前，国外临床上常用的食物过敏原体外检测方法主要有放射性变应原吸附试验(RAST)、CAP变应原检测系统及ELISA。RAST检测sIgE特异性高，影响因素少，与皮肤试验和支气管激发试验符合率高，且安全。但是该检测方法存在放射性核素污染，并且待测标本中有相同特异性的IgG时，该检测结果将会受影响。CAP变应原检测系统避免了RAST的放射性核素污染，且CAP上特异性结合的是抗IgE，也避免了IgG的影响。然而我国目前尚未自行研制出相应的仪器及试剂，故多为进口仪器和试剂，不仅成本较高，而且变应原具有明显的地域性，我国的变应原并不完全符合，故存在一定的检测误差。目前ELISA检测方法尚存在些许缺陷，酶标记抗人IgE价格昂贵，大多依靠进口，制备复杂，适用范围有限，不适合大规模推广使用。 我国国内临床上常用的食物过敏原检测方法主要为间接法ELASA，尚未有双抗原夹心法相关的报道。
