基本信息
- 项目名称：
- 清咽滴丸及六种成分提取物体外抗柯萨奇病毒B3,B5作用的研究
- 来源：
- 第十二届“挑战杯”省赛作品
- 小类：
- 生命科学
- 大类：
- 自然科学类学术论文
- 简介：
- 本课题主要通过对清咽滴丸（Qingyan Diwan）及其六种成分（甘草，诃子，青黛，冰片，薄荷，人工牛黄）抗柯萨奇病毒B3和B5(Coxsackie virus B3, B5; CVB3, CVB5)的体内外研究，探索祖国中医药的抗病毒疗效及机理。前期细胞学试验和血清药理学研究表明清咽滴丸、甘草和诃子能抗CVB3、 CVB5。说明甘草和诃子是清咽滴丸抗柯萨奇病毒的主药。
- 详细介绍：
- 本课题旨在研究清咽滴丸及甘草、诃子、薄荷、冰片、青黛、（人工）牛黄提取物对 Vero 细胞的毒性作用，以及其抗柯萨奇病毒B3、B5(Coxsackie virus B3, B5; CVB3, CVB5)的作用和机理。扩大清咽滴丸及其六种中药成分的应用范围。通过对中药的抗病毒作用进行科学研究，增加祖国中药材的药用景。 （1）体外细胞试验：通过体外培养Vero细胞，将细胞用柯萨奇病毒B3，B5分别感染，再用各种浓度药液接种被感染细胞，观察药物毒性和病毒致细胞病变效应（Cytopathic effect, CPE）,用MTT法辅助检测细胞活性情况，检验药物的毒性和各药物的抗病毒效应。 （2）血清药理学试验：用血清药理学的方法验证有效药物（甘草，诃子和清咽滴丸）的生物学活性。具体方法为：大鼠禁食12h，经胃灌服适宜浓度药液，灌药前及灌药后每隔20min采血一次，连续多次，将含药血清分类编号，分别处理后配制成细胞生长液，用于治疗被柯萨奇病毒感染后的Vero细胞。观察细胞病变情况，用MTT法辅助检测细胞活性情况，了解经动物吸收代谢后的含甘草、诃子和清咽滴丸活性成分的血清的抗病毒效果，从而进一步了验证三者抗柯萨奇病毒的可能性。提示有效药物抗病毒效果符合动物药代药动学特点。 （3）重复上述试验 结果，前期细胞学试验和血清药理学研究表明清咽滴丸、甘草和诃子能抗CVB3、 CVB5。说明甘草和诃子是清咽滴丸抗柯萨奇病毒的主药。
作品专业信息
撰写目的和基本思路
- 目的： 研究清咽滴丸及甘草、诃子、薄荷、冰片、青黛、牛黄提取物对 Vero 细胞的毒性作用，以及其抗柯萨奇病毒B3、B5的作用和机理。扩大清咽滴丸及其六种中药成分的应用范围。 思路： （1）体外细胞试验 （2）血清药理学试验
科学性、先进性及独特之处
- （1）本课题中所用材料——清咽滴丸、甘草、诃子、青黛、冰片、薄荷、牛黄——抗柯萨奇病毒B3、B5的疗效，国内外均无报道，本课题为首次报道。 （2）血清药理学：该方法用于研究中药及中成药药理作用在之前并没有被广泛使用，而且用该法来研究药物抗病毒作用尚无报道。
应用价值和现实意义
- （1）增加清咽滴丸的适用范围，为其扩大临床应用提供了实验依据，有利于其国际注册与出口。 （2）增加甘草和诃子的药理作用，辅助祖国中药材的科学研究。 （3）为由柯萨奇病毒引起的各种疾病的治疗提供新的思路，特别是小儿病毒性心肌炎，柯萨奇病毒性糖尿病，疱疹性咽峡炎等 。 （4）总之：经济效益较大
学术论文摘要
- 清咽滴丸（Qingyan Diwan）为新型主治咽炎的中药合剂，其主要成分为人工牛黄、甘草、青黛、冰片、诃子、薄荷脑。具有疏风清热，解毒利咽，消肿止痛的功效，临床效果显著。现代药理学研究表明，清咽滴丸有很强的抑菌杀菌作用，尤其是对白色念球菌和金黄色葡萄球菌。刘剑对清咽滴丸抗常见呼吸道病毒的实验研究提示，清咽滴丸能在细胞水平上直接抑制 HSV-1 和 ADV11 。 柯萨奇病毒 B3、B5 已证明是无菌性脑炎、流行性胸痛、糖尿病、成人病毒性心肌炎等的主要病原体之一。隐性感染的孕妇常有胎膜早破的现象。孕妇显性感染柯萨奇B3、B5可致胎儿畸形、宫内感染、脑膜炎、新生儿心肌炎等。其中新生儿病毒性心肌炎致死率极高，是新生儿死亡的重要原因之一。1993年，曾报道沈阳某妇幼保健所发生一起新生儿医院内感染CVB3、CVB5，至少有8名婴儿死于病毒性心肌炎所导致的多器官功能衰竭。目前尚无特效药介入治疗或预防。鉴于各种抗病毒西药毒副作用较大,本文以 Vero 细胞作为体外筛选细胞模型，探讨清咽滴丸及六种主要中药成分对 CVB3,B5 的作用。
获奖情况
- 无
鉴定结果
- 该作品具有真实性、创新性，为申报者独立设计及完善，结果可信。
参考文献
- [1] 胡树春,吴红敏,徐英.新生儿柯萨奇病毒感染死亡病例临床及病理分析[J].中国医科大学学报，1994，23（5）：482-483. [2] 王亚峰，张美英,等.苦丁茶水提物体外抗柯萨奇病毒B3活性的实验研究[J].中华中医药杂志,2008，23（11）：976-978. [3] 赵欣，杨毅恒.含丹参、甘草、大黄的中成药与西药配伍的处方分析[J] .中国药房,2008,19(36):2878-2880. [4] 卫文峰，张国成,等. 柴胡，黄岑，炙甘草对小鼠CVB3心肌炎治疗作用的研究[J].中国当代儿科杂志,2003，5(3)：223—225. [5] 蔡小华，谢兵,等.诃子化学成分及药理作用的研究进展[J]. 安徽农业科学,2008,36(25):10938-10941. [6] 贺石林，李元建．医学科研方法学[M]．北京：人民军医出版社，2003，411-420
同类课题研究水平概述
- 柯萨奇病毒B3，B5是正链RNA病毒，属小RNA病毒科，肠道病毒属，主要通过粪-口途径传播，也可通过呼吸道或眼部粘膜感染。柯萨奇病毒B组共有6个血清型，B组病毒感染乳鼠可产生局灶性炎症，引起痉挛性麻痹，并常伴有心肌炎、脑炎和棕色脂肪坏死等。CVB3 是病毒性心肌炎的主要病原体，病毒持续感染可导致扩张型心肌病。CVB5可以引起病毒性肝炎，持续感染可诱发肝硬化、肝癌。 清咽滴丸为新型主治咽炎的中药合剂，其主要成分为人工牛黄、甘草、青黛、冰片、诃子、薄荷脑。具有疏风清热，解毒利咽，消肿止痛的功效，临床效果显著。现代药理学研究表明，清咽滴丸有很强的抑菌杀菌作用，尤其是对白色念球菌和金黄色葡萄球菌。刘剑对清咽滴丸抗常见呼吸道病毒的实验研究提示，清咽滴丸能在细胞水平上直接抑制 HSV-1 和 ADV11 。 甘草归脾、胃、心、肺经，具有补脾益气、祛痰止咳、调和诸药的功效，同时还有调节机体免疫力、抗菌、抗病毒的作用，尤其是在治疗感冒及止咳药物中应用极为普遍。有实验推测其原因为甘草具有肾上腺皮质激素作用，可消炎、抗变态反应。抗病毒的主要活性成分为甘草甜素和甘草多糖，既可直接清除病毒颗粒，又可能诱生干扰甘草中黄酮类化合物中抗菌成分较多，作用较强。其对革兰阳性菌中的金黄色葡萄球菌和枯草杆菌的抑制作用相当于链霉索；对酵母菌和真菌的作用高于链霉素；对革兰阴性菌中的大肠杆菌和绿脓杆菌抑制作用相当于链霉素 。体外实验表明，甘草可抑制杜氏利什曼原虫和硕大利什曼原虫的体前鞭毛和无鞭毛的生长 诃子味苦、酸、涩，性平而微温，主要入肺经和大肠经。涩肠敛肺，降火利咽，用于久泻久痢，便血，肺虚喘咳，久嗽不止，咽痛音哑。研究发现，诃子体外对多种细菌和病毒有抑制作用，如痢疾杆菌、淋球菌、金葡萄、表皮葡萄球菌、肠球菌、肺炎克雷伯菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、幽门螺杆菌、白色念珠球菌和耐药表皮菌等，以及乙肝病毒（HBV）、对阿昔洛韦耐药的I型单纯性疱疹病毒和u型单纯性疱疹病毒等。 目前，尚无人系统的研究清咽滴丸、甘草、诃子抗柯萨奇病毒的研究，于是我们着意于此，进行了部分深入浅出的实验，以期丰富清咽滴丸、甘草及诃子的药理作用，为治疗柯萨奇病毒导致的各种疾病提供新的治疗思路。
