基本信息
- 项目名称：
- Ⅰ型鸭肝炎病毒血清抗体ELISA诊断试剂盒
- 来源：
- 第十二届“挑战杯”省赛作品
- 小类：
- 生命科学
- 大类：
- 科技发明制作B类
- 简介：
- 各种传染病的流行使养鸭业蒙受巨大经济损失。尤其以I型鸭病毒性肝炎（DHV-Ⅰ）最严重，市场急需建立快速、有效的诊断方法。 本产品将ELISA技术应用于DHV-Ⅰ诊断试剂盒的研发，填补了市场相应产品的空缺，已申请国家发明专利；现已通过实验室研发成功，在洛阳市、平顶山、三门峡等地区推广应用，效果非常显著；本产品应用于DHV-Ⅰ的快速诊断和防控，具有广阔的市场前景和较大的经济、社会效益。
- 详细介绍：
- 近年来，随着国民生活水平的提高，国内养鸭业适应消费者对畜禽产品营养价值的要求得到了快速发展，但随着集约化养殖的普及，各种传染病的流行使养鸭业蒙受巨大经济损失。尤其以I型鸭病毒性肝炎（DHV-Ⅰ）最为严重，该病是幼龄雏鸭的高度致死性的急性传染病，发病急，传播快，死亡率高。因此市场急需建立快速、敏感、特异的DHV-Ⅰ诊断方法。 本产品将ELISA技术应用于DHV-Ⅰ诊断试剂盒的研发，填补了市场相应产品的空缺，并已申请国家发明专利（已进入实质审查阶段）；本产品已通过实验室研发成功，在洛阳市、平顶山、三门峡等地区进行初步推广应用，效果非常显著；本产品具有以下优点：（1）特异性强、敏感性高，能准确、高效检测血清抗体；（2）操作简便快速、检测结果易判定；（3）基因工程技术表达重组蛋白，生产成本低廉，能够批量生产。 本产品能应用于DHV-Ⅰ的快速诊断和防控，可在畜牧兽医研究和生产的企业、畜牧兽医相关专业大专院校、科研单位、动物出入境检验检疫单位及各级畜牧兽医行政主管部门下属动物疫病预防控制技术支持单位、各规模化养鸭场等单位推广应用，具有广阔的市场前景和较大的经济、社会效益。
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作品专业信息
设计、发明的目的和基本思路、创新点、技术关键和主要技术指标
- 目的：提供一种I型鸭肝炎病毒（DHV-Ⅰ）血清抗体酶联免疫法（ELISA）诊断试剂盒和诊断方法，及其在I型鸭病毒性肝炎的诊断、流行病学调查和免疫监测方面的应用。 基本思路：扩增出 DHV-Ⅰ中VP1抗原基因，构建重组表达质粒pET32a-VP1，将质粒转化入宿主菌BL21（DE3），体外表达VP1蛋白做抗原包被酶标板；制备出辣根过氧化酶标记的兔抗鸭IgG抗体；并优化间接ELISA技术，研制出 I型鸭肝炎病毒血清抗体ELISA诊断试剂盒。 本产品特异性强，敏感度高，操作简便快速，结果易判定，适于基层推广应用。目前国内外尚无同类产品，填补了市场相应产品的空缺。 技术关键：1、通过基因工程得到I型鸭肝炎病毒壳蛋白的主要抗原多肽；2、兔抗鸭血清IgG多抗的制备；3、酶标抗体(HRP-兔抗鸭IgG)的制备；4、ELISA诊断试剂盒的制备。
科学性、先进性
- Ⅰ型鸭病毒性肝炎传统诊断方法有临床观察及剖检、病毒分离、PCR等。但这些方法费时费力，且有些方法准确率低、特异性差，不能及时为发病鸭群提供治疗依据，易造成较大的经济损失。与此相对，本产品克服了其他诊断方法临床应用的不足，具有以下优点：（1）特异性强、敏感性高，能准确、高效检测血清抗体；（2）操作简便快速、检测结果易判定；（3）基因工程技术表达重组蛋白，生产成本低廉，能够批量生产。 本作品将ELISA技术应用于Ⅰ型鸭病毒性肝炎诊断试剂盒的研发，填补了市场相应产品的空缺。Ⅰ型鸭病毒性肝炎ELISA诊断试剂盒已申请国家发明专利，目前正处于国家专利局实质审查阶段；同时本产品已通过实验室研发成功，在洛阳市、平顶山、三门峡等地区进行初步推广应用，效果非常显著。
获奖情况及鉴定结果
- 2010年分别获以下奖励： 获第八届“挑战杯”河南省大学生创业计划竞赛优秀奖； 获第三届“挑战杯”河南科技大学学生创业计划竞赛金奖
作品所处阶段
- 本作品现处于实验室阶段，专利已进入实质审查阶段
技术转让方式
- 技术入股
作品可展示的形式
- 本作品具有实物产品，可现场演示操作过程以及实验过程的图片资料。
使用说明,技术特点和优势,适应范围,推广前景的技术性说明,市场分析,经济效益预测
- 本项目的特点与优势： （1）利用酶联免疫反应，具有极高的敏感性和特异性，同时重组蛋白为非全病毒抗原，安全性好。 （2）操作简便快捷，结果判定直观准确。 （3）重组蛋白表达量高，极大的节约成本，可用于批量检测。 该试剂盒操作简便，能较好满足不同层次人员的需要，如疫病监测、海关检疫、卫生防疫、集约化养殖到个体养殖等。在I型鸭病毒性肝炎的诊断、流行病学调查和免疫监测等方面具有很重要的应用价值，且该试剂盒成本可控制在较低范围内，有易于大范围推广应用，因而具有广阔的市场前景和较大的经济、社会效益。
同类课题研究水平概述
- 常见致病性鸭病有十余种，但国内外对鸭病试剂盒研究相对较少，并且基本上都停留在实验室研究，未在临床生产实践中应用，其中相对较成熟的产品鸭瘟病毒核酸扩增检测试剂盒和鸭病毒性肠炎病毒(DEV) ELISA试剂盒也只是在科研及小范围临床应用。 众所周知，鸭病毒性肝炎是幼龄雏鸭的一种高度致死性的急性传染病，此病的特征是发病急，传播快，死亡率高，常给养鸭场造成严重的经济损失。鸭病毒性肝炎有三种类型，Ⅰ型呈世界性分布，Ⅱ型和Ⅲ型鸭病毒性肝炎分别局限于英国和美国。目前国内流行的主要是DHV-Ⅰ，是严重危害鸭子的主要传染病之一。建立快速、敏感、特异的诊断方法是有效预防和控制该病的关键措施之一。 实验室研究表明，鸭肝炎病毒各种检测方法中，最经典的是中和试验，但是比较繁琐、费时，不能用于快速诊断，不适与基层推广；琼脂扩散试验虽然简便易行，适于基层推广，但是其特异性与敏感性有待进一步提高；而病毒的RT-PCR法虽然敏感性与特异性极高，但是费用及操作要求较高，限制了基层的推广；其他方法也都由于各方面原因而限制了大范围的推广应用，造成基层养殖场不能及时、有效地进行防治。 自1971年Engvall和Perlmann用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定IgG后，该技术迅速发展、广泛应用。该技术的原理是：①使抗原结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。②使抗原与某种酶连接成酶标抗原，这种酶标抗原既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在测定时，把受检标本（测定其中的抗体）和酶标抗原按不同的步骤与固相载体表面的抗原起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅定性或定量分析。由于酶的催化频率很高，故可极大地地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。 而本研究的Ⅰ型鸭肝炎病毒血清抗体ELISA诊断试剂盒国内外还未见商品化产品。Zhao等对鸭肝炎病毒ELISA检测的研究，陈溥言建立的夹心ELISA法检测I型鸭肝炎病毒(I-DHV)以及孔留五对I-DHV VP1基因功能的研究，这些实验室研究都为鸭肝炎病毒血清抗体ELISA诊断试剂盒的研制和产品开发提供一定的理论参考基础。
