基本信息
- 项目名称：
- 黑龙江林蛙（Rana amurensis）消化道5-HT细胞的分布及形态学观察
- 来源：
- 第十二届“挑战杯”省赛作品
- 小类：
- 生命科学
- 大类：
- 自然科学类学术论文
- 简介：
- 应用免疫组织化学方法对黑龙江林蛙消化道内的5-HT细胞进行了免疫组织化学的定位研究和形态学观察。5-HT 细胞在黑龙江林蛙消化道的各个部位均有分布，其中以胃幽门部分布密度为最高。5-HT细胞的形态多样，有圆形、椭圆形、锥体形和梭形等，细胞分布于上皮细胞之间、上皮基部和腺泡上皮细胞之间。
- 详细介绍：
- 近些年来，随着免疫组织化学技术的发展与应用， 不少学者用5-HT 抗血清对不同脊椎动物的消化道 5-HT阳性细胞进行了定位研究，其中两栖类消化道内分泌细胞的研究亦有一些报道，但分歧较大。两栖动物在整个脊椎动物中居于承上启下的重要位置，对其消化道内分泌细胞进行研究，无疑具有重要的比较内分泌学意义。黑龙江林蛙（Rana amurensis）隶属两栖纲（Amphibia），无尾目（Anura），蛙科（Ranidae），蛙属(Rana)，其消化道5-HT 免疫活性细胞的免疫组化研究未见报道。鉴于此，试验采用卵白素-生物素-过氧化物酶复合物法，对黑龙江林蛙消化道内5-HT免疫活性内分泌细胞的分布与形态学进行了研究，丰富了消化道比较内分泌学资料。同时还为进一步研究5-HT对两栖类消化道功能的影响提供形态学基础。 1、研究方法：采用ABC（avidin-biotin-peroxidase complex）免疫组织化学法。 2、技术路线和实验方案（免疫组织化学）：常规石蜡切片脱蜡复水。滴加正常山羊血清（3:200），室温（15~25 ℃）孵育20 min，封闭非特异性反应部位。倾去血清，滴加一抗，室温过夜。PBS浸洗3 次×5 min，滴加二抗（羊抗兔IgG 抗血清，稀释倍数1:200），孵育45 min，PBS 浸洗3 次×5 min。滴加卵白素-生物素-过氧化物酶（ABC）试剂（稀释倍数1:1:100），孵育40 min。PBS 浸洗3 次×5 min，滴加DAB-H2O2显色后，冷PBS 冲洗，冷蒸馏水、自来水冲洗。苏木精复染，常规石蜡脱水透明，封片。对照切片以ABC试剂药盒中正常山羊血清代替一抗进行孵育，其余步骤同上。 3、观察与计数：在Olympus BH-2型显微镜下观，并对每个部位的切片随机取10个400倍视野（物镜40×,目镜10×）计数，取平均值（X±SD），表示5-HT细胞的分布密度。用单因素方差分析对同一种内分泌细胞在不同部位的平均数进行统计学处理。应用LEICA DC500 DM LB2显微镜成像系统拍照。 4、结果：在光镜下，黑龙江林蛙消化道各部位均检测到5-HT细胞，此细胞为棕黑色或深棕色，背景为蓝色，反差强很易辨认。对照片呈阴性。 关于黑龙江林蛙消化道5-HT细胞的比较研究到现在未见报道，对其研究有重要的生物学意义。 （1）进一步丰富消化道比较内分泌学资料。 （2）为两栖类消化生理学的研究提供形态学基础。 （3）黑龙江林蛙的消化生理以及人工饲养，扩大饲养规模提供基础资料和理论依据。
作品专业信息
撰写目的和基本思路
- 一、目的 对黑龙江林蛙消化道5-HT细胞的分布、分类和形态进行定位研究，以期为认识其消化机能积累资料，并为消化生理学的研究提供形态学依据，进一步丰富比较内分泌学资料，同时为林蛙的养殖提供理论参考。 二、基本思路 1、材料：黑龙江林蛙 2、研究方法：免疫组织化学法 3、技术路线和实验方案 4、观察与计数 5、结果
科学性、先进性及独特之处
- 一、科学性及先进性 本实验室多年来，一直从事两栖爬行动物学方面的研究工作，主要成员已掌握石蜡切片技术以及免疫组织化学技术。 二、独特之处 1、对黑龙江林蛙的研究，国内外仅从生态分布，形态学及其养殖等方面有过文献报道，而对其消化道5-HT细胞的研究国内外尚未见报道。 2、首次对黑龙江林蛙消化道内分泌细胞进行免疫组化研究。 3、首次探讨黑龙江林蛙消化道内分泌细胞形态与功能之间的关系。
应用价值和现实意义
- 黑龙江林蛙是食、药两用的珍贵蛙种，其营养价值高，因其专摄取昆虫类食物，又称“纯绿色食品”。此外，制取哈士膜油的副产品如肌肉、内脏等均可饲喂家禽、以及珍贵野生家养的毛皮兽；也可加工成混合饲料作为家禽、鱼类的饲料.它属国家保护的有益的或者有重要经济、科学研究价值的陆生野生动物中有很高经济价值的两栖动物。 关于黑龙江林蛙消化道5-HT细胞的比较研究到现在未见报道，对其研究有重要的生物学意义。
学术论文摘要
- 应用ABC（avidin-biotin-peroxidase complex）免疫组织化学方法对黑龙江林蛙（Rana amurensis）消化道内的5-HT免疫活性细胞（5-Hydroxytryptamine immunoreactive cell，5-HT cell）进行了免疫组织化学的定位研究和形态学观察。结果显示：5-HT 细胞在黑龙江林蛙消化道的各个部位均有分布，其中以胃幽门部分布密度为最高，胃贲门部次之，空肠部最低。5-HT细胞的形态多样，有圆形、椭圆形、锥体形和梭形等，细胞分布于上皮细胞之间、上皮基部和腺泡上皮细胞之间。5-HT细胞形态与其内、外分泌功能是相适应的。
获奖情况
- 已发表在中国农学通报2010年第26卷第14期第94-97页
鉴定结果
- 实验方法先进，数据可靠，实验结果准确科学。此项研究为消化生理学的研究提供形态学依据，进一步丰富比较内分泌学资料，同时为林蛙的养殖提供理论参考。
参考文献
- 一、现有技术 免疫组织化学技术 二、检索目录 1、黑龙江林蛙 2、消化道 3、5-HT细胞
同类课题研究水平概述
- 迄今为止，国内外已有许多学者对脊椎各纲动物消化道中的5-HT内分泌细胞进行了免疫组织化学研究。其中关于鱼类，方之平等对鲤鱼（Common carp）肠黏膜多种内分泌细胞进行了免疫组织化学鉴别和定位，杨青等在黄鳝(Sparus latus)消消化道中检测到5-HT细胞，叶海辉等对中华乌塘鳢(Bostrichthys sinensis)消化道内的多种分内泌细胞进行了鉴别与定位。 还有许多学者对爬行动物消化道5-HT细胞也进行了大量的研究。李淑兰等对虎斑颈槽蛇(Rhabdoph is tigrinus)、变色树蜥(Calotes versicolor)、黑龙江草蜥(Takydromus amurensis)等消化道5-HT细胞进行了免疫组织化学鉴别和定位，黄徐根等在蓝尾石龙子（Eumeces elegans）消化道内检测到5-HT、SS、Gas三种内分泌细胞，余中宾等对无蹼壁虎(Gekko swinhonis)等爬行类动物消化道中5-HT细胞进行了研究。 对鸟类报道还较少，Yamada等曾对七种禽类肌胃的内分泌细胞进行了系统研究，共检出了九种消化道激素细胞，但不同的研究者即使对同种禽类的有关报道亦见较大差异。邓泽沛等在鹅消化道中检测到促胃素释放肽、生长抑素、5-HT和胰多肽四种内分泌细胞，李淑兰等对家鸽（Columba livia domesticus）消化道中5-HT免疫反应细胞进行了研究。 对哺乳动物消化道内分泌细胞的研究较多，方之平等对犏牛（Pian niu），黄威权等对大鼠（Rat），李淑兰等对家兔(Oryctolagus cuniculus)消化道中的5-HT细胞进行了免疫组织化学观察，杨贵波等对大熊猫（Giant Panda）消化道中的5-HT、生长抑素等10种内分泌细胞进行了研究，并对其消化道内分泌细胞的分布型也做了研究。 关于两栖类消化道5-HT细胞的报道也较多，张盛周等检测到无斑肥螈(Pachytriton labiatum)、张秋金等检测到黑斑蛙(Rana nigromaculata)、李淑兰等检测到东方铃蟾(Bombinaorientali)、欧阳凤等检测到叶氏隆肛蛙(Paa(Feirana)yei)消化道各段均有5-HT细胞分布。但对于黑龙江林蛙消化道5-HT细胞免疫组织化学定位及比较的研究未见报道。
