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基本信息

作品名称:
拟南芥热激因子AtAtHsfA1a表达纯化的研究
大类:
自然科学类学术论文
小类:
生命科学
简介:

本研究以构建的表达拟南芥热激因子AtHsfA1a的大肠杆菌E coli M15为材料,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷诱导表达AtHsfA1a,再通过Ni-NTA-Agarose亲和层析纯化表达的AtHsfA1a,通过SDS-PAGE电泳分析表达蛋白和纯化蛋白,获得了表达纯化的AtHsfA1a。从基因表达调控水平上研究植物对逆境适应的分子机制和研究耐逆境基因的作用机理,提高植物各种抗逆性有重大意义。

详细介绍:

热激转录因子又称为热激因子(heat shock transcription factors,HSFs)是真核生物热激反应的主要转录调控因子。在拟南芥中存在21个热激因子的同源体,组成热激因子家族。虽然目前对绝大多数同源体的功能还不了解,但研究显示其中热激因子AtHsfA1a是与耐逆境有关的主要调控因子,对AtHsfA1a逆境信号转导机理研究显示,与大多数HSFs相似,在非逆境条件下,AtHsfA1a以非活性的单体形式存在,逆境诱导AtHsfA1a单体形成三体(活性)、与靶DNA启动子区热激元件(HSE)特异性结合,从而调控逆境防御基因的表达。然而,AtHsfA1a在逆境应答途径下游中如何诱导防御基因的表达仍然不清楚。
因此本研究以构建的表达拟南芥热激因子AtHsfA1a的大肠杆菌E coli M15(pET30a/ His6- AtHsfA1a)为材料,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达AtHsfA1a,再通过Ni-NTA-Agarose亲和层析纯化表达的AtHsfA1a,通过SDS-PAGE电泳分析表达蛋白和纯化蛋白,获得了表达纯化的AtHsfA1a。
本作品建立了稳定的适用于逆境应答研究的AtHsfA1a蛋白的表达、纯化体系,为研究AtHsfA1a的逆境应答行为提供研究材料,为进一步全面认识AtHsfA1a调控功能多样性的生理代谢基础奠定基础。从基因表达调控水平上研究植物对逆境适应的分子机制以及研究耐逆境基因的作用机理,对揭示植物耐逆境反应机理亦具有显著意义,也是进一步应用耐逆境基因改善植物耐逆性的理论基础,在农业上对提高植物各种抗逆性具有重大意义。

获奖情况:

第十二届“挑战杯”省赛作品 省赛二等奖
本作品是指导教师的科研课题,国家自然科学基金项目(31060039)、云南省自然科学基金面上项目(2010ZC163)。