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基本信息

项目名称:
探索考马斯亮蓝G-250染料进行恶性疟原虫抗药性测定的研究
小类:
生命科学
简介:
根据蛋白质与染料相结合的原理设计的考马斯亮兰法(Bradford法)是目前六种蛋白质含量测定常用方法中灵敏度最高最有效的一种。本次实验将从考虑通过使用考马斯亮蓝G-250染料,来对抗药性测定版中培养基中的蛋白质进行抗药性测定。
详细介绍:
疟疾是一种流行广泛,对人类危害最为严重的重要传染病之一。随着蚊虫对杀虫剂及疟原虫对各种治疗药物的抗性的不断增加,且缺乏有效地预防疫苗,防治形势一直很严峻。因此,抗药性的测定变得越发重要。 目前对于疟原虫抗药性的测定方法主要有三种:一种是通过放射性H3标记, 另外一种是通单克隆抗体进行酶标测定,最近,有通过对核酸测定的方法测定抗药性的报道。 H3标记,价格昂贵,而且有放射性。酶标测定, 不稳定,价格昂贵。SYBR Green I荧光核酸测定的方法,虽然价格便宜,但是需要不常见的设备荧光读盘仪。 我们希望,通过使用考马斯亮蓝G-250染料,来对抗药性测定版中培养基中的蛋白质进行抗药性测定。根据蛋白质与染料相结合的原理设计的考马斯亮兰法(Bradford法)是目前六种蛋白质含量测定常用方法中灵敏度最高最有效的一种。 所以本次实验将从考虑应用Bradford法与杨照青教授实验室已经建立的SYBR Green I,对照研究,探索考马斯亮蓝G-250染料用于抗药性测定的可能性和可行性。 类似研究国内外未见报道。

作品图片

  • 探索考马斯亮蓝G-250染料进行恶性疟原虫抗药性测定的研究
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作品专业信息

撰写目的和基本思路

应用Bradford法与杨照青教授实验室已经建立的SYBR Green I,对照研究,探索考马斯亮蓝G-250染料用于恶性疟原虫抗药性测定的可能性和可行性。

科学性、先进性及独特之处

目前对疟原虫抗药性的主要三种测定方法中,H3标记,价格昂贵,且有放射性。酶标测定, 不稳定,价格昂贵。SYBR Green I荧光核酸测定法,虽然价格便宜,但是需要不常见的设备荧光读盘仪。本次实验考虑使用考马斯亮蓝G-250染料,来对抗药性测定版中培养基中的蛋白质进行抗药性测定,探索考马斯亮蓝G-250染料用于抗药性测定的可能性和可行性。 国内外未见类似研究报道。

应用价值和现实意义

探索一种价格价格便宜、操作简便的疟原虫抗药性测定的方法,为以后的相关研究提供一定的参考依据。

学术论文摘要

目的 探索考马斯亮蓝G-250染料用于恶性疟原虫抗药性测定的可能性和可行性。 方法 根据考马斯亮蓝法(Bradford法),在加有氯喹浓度梯度药的96孔板的恶性疟原虫标准株3D7的培养基中,加入考马斯亮蓝G-250染料,用酶标仪进行OD值测定从而达到蛋白的含量测定,以反映药物的抗药性。同时与杨照青教授实验室已经建立的SYBR Green I法做对照分析。 结果 Bradford法测定结果中疟原虫标准株3D7的OD值与加入药物氯喹的浓度梯度并没有较好的线性关系。并且以近来广为应用的蛋白定量方法Bicinchoninic acid (BCA )进行对比测定所得结果也是如此。而用SYBR Green I法的抗药性测定结果中疟原虫标准株3D7的OD值与加入药物氯喹的浓度梯度则具有较好的线性关系。 结论 考马斯亮蓝G-250染料不具有用于恶性疟原虫抗药性测定的可能性和可行性。

获奖情况

鉴定结果

参考文献

[1]王孝平; 邢树礼 考马斯亮蓝法测定蛋白含量的研究 [J]天津化工 2009-05-30 [2]杜承 ,恶性疟原虫Pf332抗原的免疫原性分析[D]吉林大学 2010-06-01 [3]Basco, L. K. 2003. Molecular epidemiology of malaria in Cameroon. XV.Experimental studies on serum substitutes and supplements and alternative culture media for in vitro drug sensitivity assays using fresh isolates of Plasmodium falciparum. Am. J. Trop. Med. Hyg. 69:168–173. [4]Basco, L. K. 2003. Molecular epidemiology of malaria in Cameroon. XVII. Baseline monitoring of atovaquone-resistant Plasmodium falciparum by in vitro drug assays and cytochrome b gene sequence analysis. Am. J. Trop. Med. Hyg. 69:179–183. [5]Basco, L. K. 2004. Molecular epidemiology of malaria in Cameroon. XX.Experimental studies on various factors of in vitro drug sensitivity assays using fresh isolates of Plasmodium falciparum. Am. J. Trop. Med. Hyg.70:474–480

同类课题研究水平概述

目前对于疟原虫抗药性的测定方法主要有三种:一种是通过放射性H3标记, 另外一种是通单克隆抗体进行酶标测定,最近,有通过对核酸测定的方法测定抗药性的报道。 H3标记,价格昂贵,而且有放射性。酶标测定, 不稳定,价格昂贵。SYBR Green I荧光核酸测定的方法,虽然价格便宜,但是需要不常见的设备荧光读盘仪。 我们希望,通过使用考马斯亮蓝G-250染料,来对抗药性测定版中培养基中的蛋白质进行抗药性测定。根据蛋白质与染料相结合的原理设计的考马斯亮兰法(Bradford法)是目前六种蛋白质含量测定常用方法中灵敏度最高最有效的一种。 所以本次实验应用Bradford法与杨照青教授实验室已经建立的SYBR Green I,对照研究,探索考马斯亮蓝G-250染料用于抗药性测定的可能性和可行性。 类似研究国内外未见报道。
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