基本信息
- 项目名称：
- PRRSV云南地方流行毒株的分离与初步鉴定
- 来源：
- 第十一届“挑战杯”国赛作品
- 小类：
- 生命科学
- 大类：
- 自然科学类学术论文
- 简介：
- 本论文将经RT-PCR检测为PRRSV阳性的病料（肺脏），采用细胞分离的方法对病毒进行分离，最后对细胞培养产物进行鉴定。
- 详细介绍：
- 本论文将经RT-PCR检测为PRRSV阳性的病料（肺脏），采用PAM细胞和Marc-14细胞对病毒进行分离，然后应用间接免疫荧光、电镜观察、动物接种试验对细胞培养产物进行鉴定，最后结果表明成功分离了一株云南PRRSV，命名为YN-1株。
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作品专业信息
撰写目的和基本思路
- 由于PRRS不仅与其它许多引起猪繁殖障碍的疾病的临床症状非常相似，而且极易发生混合感染，同时不同猪场感染PRRSV后临诊症状又有很大的差异，因此确诊有赖于实验室诊断。进一步确诊，应采用病毒的分离鉴定。病毒的分离不仅为基本的确诊奠定基础，而且还为疾病的进一步研究提供原材料。分离与鉴定PRRS云南地方毒株，可为深入开展PRRS相关研究、为临床诊断和疫病的防制开辟新途径，从而使PRRS得以有效地控制。
科学性、先进性及独特之处
- PRRS的诊断主要根据流行病学特点、临诊症状，剖检病变以及结合猪群的生产性能变化等作出初步诊断。进一步确诊，应采用病毒的分离鉴定、血清学试验和分子生物技术。病毒分离可选流产胎儿脏器、发病死亡猪的肺脏等病料接种PAM、Marc－l45等细胞。病毒分离物可用间接免疫荧光、电镜观察等进行鉴定。此外，还建立了RT－PCR、核酸探针原位杂交技术，可直接从病料中检测PRRSV核酸。
应用价值和现实意义
- 目前蓝耳病已经对我国的养猪业造成了极大的危害和重大的经济损失。由于PRRS极易发生混合感染，同时不同猪场感染PRRSV后临诊症状又有很大的差异，因此确诊有赖于实验室诊断。病毒的分离不仅为基本的确诊奠定基础，而且还为疾病的进一步研究提供原材料分离与鉴定PRRS云南地方毒株，可为深入开展PRRS相关研究、为临床诊断和疫病的防制开辟新途径，从而使PRRS得以有效地控制。
学术论文摘要
- 本试验将从云南某猪场采取、并经RT-PCR检测为PRRSV阳性的病料(肺脏)处理后接种到猪肺巨噬细胞（PAM）和Marc-145细胞上。接种后三天，猪肺巨噬细胞开始出现堆聚、脱落、崩解；在Marc-145细胞盲传3代后，细胞也出现了相似的细胞病变效应（cytopathic effects，CPE）。将细胞培养物经超速离心、电镜观察，可见呈球形的病毒粒子，直径约为45－55nm；间接免疫荧光检测为阳性；接种PRRS、PRV、CSFV阴性的仔猪，15天后猪只出现体温升高并伴有食欲减退，精神不振等症状，采血经RT-PCR法检测，结果亦为PRRSV阳性。表明成功分离了一株云南PRRSV，命名为YN-1株。其毒力测定为1×10-5.6~1×10-5.7 TCID50/0.1ml。
获奖情况
- 校第八届“挑战杯”学生课外学术科技作品竞赛中荣获“一等奖”； 第五届“挑战杯”学生课外学术科技作品竞赛中荣获“省级二等奖”。
鉴定结果
- 结果表明成功分离了一株云南PRRSV，命名为YN-1株。其毒力测定为1×10-5.6~1×10-5.7 TCID50/0.1ml。
参考文献
- RT-PCR、细胞培养技术、血清学检测 参考文献（11篇） 《物病毒学》、《Mdecular characterization of porcine reproductive and respiratory disease virus ，a member of the arterivirus group 》、《应用间接荧光法从国内生殖障碍综合征猪群中检测生殖和呼吸综合征用性抗体的研究》、《A new order comprising Coromviridae and- arteriviriade》、《猪繁殖与呼吸道综合征病毒(PRRSV)CH-1a株基因型的鉴 [7]猪繁殖与呼吸综合症研究进展》、《猪繁殖和呼吸障碍综合征的诊断方法》、《云南省蓝耳病血清流行病学调查》、《PRRSV感染Marc-145细胞凋亡的形态学观察》、《细胞培养对PRRSV-SD分离株滴度的影响》
同类课题研究水平概述
- 猪繁殖与呼吸综合征（porcine productive and respiratory syndrome, PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒引起的以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸衰竭为主要症状的传染病，临床症状主要表现为母猪流产、早产、产死胎、产木乃伊胎、仔猪成活率下降和育成猪呼吸道症状等。猪繁殖与呼吸综合症于1987年在美国北卡罗来纳州首先发现，随后在荷兰、加拿大、德州、英国、西班牙、瑞士、法国等世界许多国家均有发生。1996年我国专家郭宝清等首次从国内发病猪群中分离出猪繁殖与呼吸综合征病毒，从而确认了我国存在本病。因病猪可见耳病青紫，呈蓝紫色，故本病又称蓝耳病。自2007年以来,我国有26个省份先后发生了高致病性猪蓝耳病疫情。2007年1月，国家农业部通过对分离到的病毒采用全基因序列的分析等技术手段，最终确定变异蓝耳病病毒是猪高热病的主要病原。目前蓝耳病已经对我国的养猪业造成了极大的危害和重大的经济损失，防治高致病性蓝耳病已经成为当前重大动物疫情防控工作的重中之重。 PRRSV（ porcine productive and respiratory syndrome virus）为单股正链RNA病毒，国际病毒分类委员会第七次报告将其归于套式病毒目动脉炎病毒科动脉炎病毒属。PRRSV有囊膜，病毒粒子呈球形，直径50-65nm，表面较光滑，核衣壳呈立方形，核心直径25-35nm, 核衣壳上有长约5nm的短突起。PRRSV含有囊膜，因此对氯仿、乙醚等脂溶剂敏感；PRRSV对温度和PH敏感，37℃ 48小时和50℃ 45min可使病毒失去感染性，56℃ 45min病毒完全失去活性，对低温-20℃和一70℃PRRSV具有较好的稳定性；PRRSV在pH6.5-7.5之间相对稳定，pH高于7或低于5时，感染力很快消失。PRRSV基因组结构与其它动脉炎病毒和冠状病毒相似，病毒粒子核酸为单股、正链RNA，含有polyA，其碱基数为15kb。根据抗原性差异，可将PRRSV分为欧洲型和美洲型，前者主要流行于欧洲，后者主要流行于美洲和亚太地区，但近来在欧洲也分离到美洲型毒株，在北美分离到类似欧洲型的美洲型毒株。我国目前的流行毒株仍属于美洲型。不同的PRRSV毒株对猪的致病力差异很大，而且PRRSV还可引起免疫抑制和持续性感染。
